Kit de purification de l'ARN total micro plus
Purification rapide de l'ARN total - y compris le microARN - à partir de petites quantités d'intrants
Kit de purification de l'ARN total micro plus
Purification rapide de l'ARN total - y compris le microARN - à partir de petites quantités d'intrants
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Aperçu du produit
Le kit Total RNA Purification Micro Plus de Norgen fournit une méthode rapide et sensible pour l'isolement et la purification de l'ARN total à partir de petites quantités de cellules animales cultivées, d'échantillons de tissus et d'échantillons microdisséqués, y compris la microdissection par capture laser (LCM). Le kit purifie toutes les tailles d'ARN, du grand ARNm et de l'ARN ribosomal jusqu'au microARN (miARN) et au petit ARN interférent (siARN). L'ADN génomique est éliminé de l'échantillon à l'aide d'une colonne d'élimination de l'ADN génomique, et l'ARN est préférentiellement purifié des autres composants cellulaires tels que les protéines, sans utilisation de phénol ou de chloroforme. L'ARN purifié est de la plus haute intégrité et peut être utilisé dans un certain nombre d'applications en aval, notamment la PCR en temps réel, la PCR par transcription inverse, le transfert de Northern, la protection par la RNase et l'extension d'amorces, ainsi que les essais de réseaux d'expression.
Technologie de purification de Norgen
La purification est basée sur la chromatographie sur colonne de spin utilisant la résine propriétaire de Norgen comme matrice de séparation. L'ARN est préférentiellement purifié des autres composants cellulaires tels que les protéines sans utilisation de phénol ou de chloroforme. Le processus consiste d'abord à lyser les cellules ou le tissu d'intérêt avec le tampon RL fourni (voir le diagramme de flux à la page 4). L'ADN est ensuite capturé sur une colonne d'élimination de l'ADN génomique. De l'éthanol est ensuite ajouté au flux de l'étape d'élimination de l'ADN et la solution est chargée sur une micro-colonne de purification de l'ARN. La résine de Norgen lie l'ARN d'une manière qui dépend des concentrations ioniques. Ainsi, seul l'ARN se lie à la colonne, tandis que les protéines contaminantes sont éliminées dans le flux ou retenues sur la partie supérieure de la résine. L'ARN lié est ensuite lavé avec la solution de lavage A fournie afin d'éliminer toutes les impuretés restantes, et l'ARN total purifié est élué avec la solution d'élution A. La conception spéciale de la micro-colonne d'essorage permet un petit volume d'élution de seulement 20 μL. L'ARN purifié est de la plus haute intégrité et peut être utilisé dans un certain nombre d'applications en aval.
Détails
Données justificatives
Figure 1. Grande sensibilité à l'isolement. Le kit Purification de l’ARN total Plus Micro Plus de Norgen permet une extraction sensible de l'ARN à partir d'une seule cellule. L'ARN total a été extrait d'un nombre décroissant de cellules HeLa, suivi d'une RT-qPCR pour détecter le transcrit S14 humain dans l'ARN isolé. Le produit PCR de S14 a été détecté à partir d'une seule cellule.
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Spécifications du kit
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Capacité de liaison maximale de la colonne
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35 μg
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Volume maximal de chargement de la colonne
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650 μL
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| Volume d'élution minimal | 20 μL |
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Taille de l'ARN purifié
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Toutes les tailles, y compris les petits ARN (< 200 nt) |
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Quantité maximale de matériel de départ : |
5 x 105 cellules Jusqu'à 7,5 mL |
| Temps nécessaire pour effectuer 10 purifications |
22 minutes
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| Rendement moyen* Cellules HeLa (1 x 105 cellules) |
1,5 μg
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* pour les tissus fibreux, un traitement supplémentaire à la protéinase K est nécessaire
Conditions de stockage et stabilité du produit
Toutes les solutions doivent être maintenues hermétiquement fermées et conservées à température ambiante. Ce kit est stable pendant un an à compter de la date d'expédition.