Kit d'isolation de l'ADN des phages
Pour la purification rapide de l'ADN total des bactériophages.
Kit d'isolation de l'ADN des phages
Pour la purification rapide de l'ADN total des bactériophages.
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Aperçu du produit
Ce kit fournit une méthode rapide de colonne pour la purification de l'ADN total d'un large spectre de bactériophages propagés dans des bactéries cultivées en milieu liquide. L'ADN est isolé sans utiliser de phénol, de chloroforme ou de procédures de baguage au chlorure de césium. La procédure basée sur une colonne d'essorage est rapide et peut être réalisée en moins de 45 minutes. Le kit est très efficace pour traiter de petits volumes de surnageant de phage (500 μL – 1 mL) et avec les traitements optionnels DNase et Protéinase K, les rendements en ADN des phages sont maximisés tout en minimisant la contamination de l’ADN de l’hôte. L'ADN purifié du phage total est de la plus haute intégrité et peut être utilisé dans un certain nombre d'applications en aval, notamment la PCR, la qPCR, le polymorphisme de longueur de fragments de restriction (RFLP), le séquence, le clonage, le transfert de Southern et plus.
Détails
Données justificatives
Figure 1. Élimination efficace de l'ADN génomique de l'hôte sans réduire le rendement de l'ADN du phage. L'ADN total a été isolé à partir de quatre cultures de phages enrichies à l'aide du kit d'isolation de l'ADN des phages de Norgen. Un prétraitement à l’ADNase I a été effectué avant d'ajouter le Lysis Buffer fourni. En bref, 20 unités d’ADNase I ont été ajoutées à 1 mL de culture de phages enrichie et le mélange a été incubé à température ambiante pendant 20 minutes. Après le traitement à l’ADNase I, la procédure a été suivie. Comme contrôle, l'ADN a été isolé à partir d'aliquotes des mêmes 4 cultures en utilisant le kit d'isolation de l'ADN de phage Norgen sans effectuer le traitement à l’ADNase I. Pour l'analyse de l'ADN, 10 µl de chaque élution de 50 µl ont été chargés sur un gel d'agarose TAE 1X. Comme on peut le voir, l'ADN du phage a été protégé du traitement à l’ADNase I par sa couche de protéine, tandis que l'ADN génomique de l'hôte a été efficacement dégradé par l’ADNase I. Ainsi, le prétraitement à l’ADNase I a permis de réduire la contamination par l'ADNg de l'hôte dans l'élution finale du phage sans influencer le rendement total de l'ADN du phage. La voie M est une échelle d'ADN de 1 kb de Norgen Highranger (Cat. 11900)
Figure 2. Le traitement optionnel à la protéinase K améliore le rendement de l'ADN pour certaines souches de phages. L'ADN total a été isolé avec et sans le traitement optionnel à la protéinase K à l'aide du kit d'isolement de l'ADN des phages de Norgen. En bref, 4 µL de protéinase K (20 mg/mL) ont été ajoutés à 1 mL de culture de phages enrichie et incubés à 55°C pendant 15 minutes avec le tampon de lyse des phages. Après le traitement à la protéinase K, la procédure a été suivie. Comme contrôle, l'ADN a été isolé à partir d'aliquotes des 8 mêmes cultures en utilisant le kit d'isolation de l'ADN des phages de Norgen sans effectuer le traitement à la protéinase K. Pour l'analyse de l'ADN, 10 µl de chaque élution de 50 µl ont été chargés sur un gel d'agarose TAE 1X et le rendement de l'ADN a été comparé à partir des huit différents types de phages (voie 1 à 8). Comme on peut le voir, le traitement optionnel à la protéinase K a amélioré de façon spectaculaire le rendement en ADN de phage dans les voies 2, 5 et 6. La voie M est une échelle d'ADN de 1 kb de Norgen Highranger (Cat. 11900)
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Spécifications du kit
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Capacité de liaison de la colonne
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50 µg
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Volume maximal de chargement de la colonne
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650 µL
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Taille de l'ADN purifié
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Toutes les tailles
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| Quantité maximale de matériel de départ |
1 x 1010 pfu/mL de phages enrichis
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| Rendement moyen* |
3 à 15 µg d'ADN à partir de 106 à 1010 pfu/mL
de phages enrichis |
| Temps nécessaire pour effectuer 10 purifications |
45 minutes
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* Les rendements moyens varient en fonction des conditions utilisées et du stade de développement.
Conditions de stockage et stabilité du produit
Toutes les solutions doivent être maintenues hermétiquement fermées et conservées à température ambiante. Ce kit est stable pendant un an à compter de la date d'expédition.