Kit de purification de l'ARN total

Aperçu du produit

Ces kits conviennent à l'isolement de l'ARN total à partir d'une série d'échantillons comprenant des cellules, des bactéries, des levures, des virus et des fluides corporels tels que le plasma/sérum, le sang, la salive, le LCR et bien d'autres encore. Extraction d'ARN de haute qualité et pureté avec d'excellentes valeurs RIN et A260/A280 adaptées aux applications en aval, notamment la qRT-PCR, la RT-PCR, les microréseaux, la NGS et bien plus encore.

Total RNA Purification Kit

Ces kits purifient toutes les tailles d'ARN, des grands ARNm aux microARN (miARN) en passant par les lncARN, dans la même fraction, sans nécessiter de phénol. Isoler toutes les séquences d'ARN à un taux égal, quelle que soit leur taille. En outre, lorsque les séquences d'ARN sont petites (par exemple, miARN), la colonne lie les petits ARN indépendamment de leur teneur en GC.

Kit de Purification de l'ARN Total Plus

Ce kit purifie l'ARN total, y compris le miRNA, à partir d'échantillons biologiques et utilise une colonne supplémentaire pour l'élimination efficace de l'ADNg contaminant, remplaçant ainsi l'étape enzymatique de la DNase.

Purification de l'ARN total Micro Plus Kit

Le kit Total RNA Purification Micro Plus de Norgen fournit une méthode rapide et sensible pour l'isolement et la purification de l'ARN total à partir de petites quantités de cellules animales cultivées, d'échantillons de tissus et d'échantillons microdisséqués, y compris la microdissection par capture laser (LCM). Le kit purifie toutes les tailles d'ARN, du grand ARNm et de l'ARN ribosomal jusqu'au microARN (miARN) et au petit ARN interférent (siARN). L'ADN génomique est éliminé de l'échantillon à l'aide d'une colonne d'élimination de l'ADN génomique, et l'ARN est préférentiellement purifié des autres composants cellulaires tels que les protéines, sans utilisation de phénol ou de chloroforme. L'ARN purifié est de la plus haute intégrité et peut être utilisé dans un certain nombre d'applications en aval, notamment la PCR en temps réel, la PCR par transcription inverse, le transfert de Northern, la protection par la RNase et l'extension d'amorces, ainsi que les essais de réseaux d'expression.

Kits de purification d'ARN total 96 puits

Ces kits de 96 puits fournit une méthode rapide pour l'isolement et la purification à haut débit de l'ARN total en 30 minutes en utilisant un collecteur de vide, une centrifugeuse à plaques ou des manipulateurs de liquides avec des capacités de vide. L'ARN total peut être isolé à partir d'un large éventail de sources d'échantillons, y compris les cellules cultivées, les tissus, le sang, le sérum, le plasma, les bactéries, les levures, les champignons et les virus.

Isolement de l'ARN après purification des VE et des exosomes

Ultracentrifugation, Exoquick, Filtration

Cat.#	Nom	Volume D'Élution	Sérum/Plasma	Urine	Milieux de culture cellulaire
55000	Kit de purification de l'ARN du plasma/sérum mini	10 - 25 µL	50 µL - 1 mL	250 µL - 1 mL	5 - 10 mL
35300	Kit de purification de l'ARN total micro	20 - 50 µL	1 - 4 mL	2 - 10 mL	10 - 20 mL
17200	Kit de purification de l'ARN total	50 - 100 µL	4 - 10 mL	11 - 30 mL	20 - 35 mL

Détails

Supporting Data

Figure 1 / 16

Figure 1. High Quality of Isolated RNA with Complete Size Range.

Unlike most competitors' kits, Norgen's Total RNA Purification Kit allows for the isolation of all sizes of RNA, from the very large RNA down to the microRNA, without the use of phenol. Total RNA was isolated from 1 x 10⁹ *E. coli* cells using Norgen’s Total RNA Purification Kit and a competitor’s kit. Five microliters and 1 µL of the 50 µL isolated RNA was analyzed on an agarose gel (Panel A) and the Agilent® 2100 BioAnalyzer RNA Nano 6000 chip (Panel B), respectively. Note the presence of small RNA species (red square) in the samples isolated via Norgen's kit and the absence of these RNA species in the competitor RNA preparation.

Figure 2. Amplification of Both Large and Small RNAs in the Same Extraction.

Norgen's Total RNA Purification Kit isolates the complete size range of RNA, including small RNAs without the use of phenol. Total RNA was isolated from 0.75 million HeLa cells using Norgen's Total RNA Purification Kit, various silica-based competitors and phenol-based TRI Reagent. RT-PCR was performed according to Shi and Chiang (2005). Fifteen microliters of the 50 µL isolated RNA were polyadenylated in a 50 µL Poly-(A)-Polymerase reaction. Four microliters of the polyadenylated RNA were used in a 20 µL reverse transcription reaction with a poly T adaptor primer. One microliter of the reverse transcription was used in a 20 µL qPCR reaction with primers against the human microRNAs (*miR-19* and *miR-21*) and large mRNA (*S15*). Only the use of Norgen's Total RNA Purification Kit resulted in detection of both microRNAs and mRNA amplification products similar to Competitor 2's kit but without the use of phenol.

Figure 3. High Quality of RNA from a Diverse Range of Inputs.

Norgen's Total RNA Purification Kit allows RNA isolation from a wide range of species or tissue types. Total RNA was isolated from 5 x 10⁸ *E. coli* cells, 1 x 10⁶ HeLa cells, 100 µL rat blood and 10 mg hamster kidney using Norgen's Total RNA Purification Kit. One microliter of the 50 µL isolated RNA was analyzed on the Agilent® 2100 BioAnalyzer using an RNA Nano 6000 chip. Note the integrity of RNA from all inputs with the presence of small RNA species. Norgen's Total RNA Purification Kit consistently isolates high quality RNA from various inputs that score a RIN value between 8 and 10.

Figure 4. Great Isolation Sensitivity.

Norgen's Total RNA Purification Kit allows sensitive RNA extraction from as little as a single cell. Total RNA was extracted from a decreasing number of 293 HEK cells from 1 million cells down to a single cell. Five microliters of the 50 µL isolated RNA was then subjected to a 20 µL reverse transcription using oligo dT primer. Three microliters of the reverse transcription was used in a 20 µL PCR reaction with primers to detect the human beta-actin transcripts. PCR products of beta-actin were detected from as little as a single cell. M is the marker lane.

Figure 5. Linear and Sensitive Isolation of Both Large and Small RNA.

Norgen’s Total RNA Purification Kit allows consistent isolation of both large and small RNA from different input amounts. Total RNA was isolated from 10 to 100,000 HeLa cells using Norgen's Total RNA Purification Kit (blue), a competitor’s silica-based kit (green) and a phenol-based RNA extraction method (red). Relative expression of miR-21 (Panel A), and S15 (Panel B) was determined by RT-qPCR of total RNA samples. In brief, one microliter of the 50 µL isolated RNA was then subjected to a 20 µL reverse transcription using miR-21 stem-loop reverse primer or oligo dT primer. Two microliters of the reverse transcription was used in a 20 µL real-time PCR reaction with primers to detect the human miR-21 (Panel A) and the S15transcripts (Panel B). The resulting threshold cycle (Ct) values were plotted against input cell number. RNA isolated using Norgen's Total RNA Purification had the best linearity (higher R²) and sensitivity (lower Ct) for both large RNA (S15) and small RNA (miR-21).

Figure 6. Effective and Consistent Detection of miRNA from Plasma.

Norgen's Total RNA Purification Kit can effectively isolate miRNA from plasma. Total RNA was isolated from 50, 100 or 200 µL of rat plasma in triplicates using Norgen's Total RNA Purification Kit (blue), a competitor’s silica-based kit (green) and a phenol-based RNA extraction method (red). Stem loop RT-qPCR using primers specific to miR-21 was performed. In brief, two microliters of the 50 µL isolated RNA was then subjected to a 20 µL reverse transcription using miR-21 stem-loop reverse primer or oligo dT primer. Three microliters of the reverse transcription was used in a 20 µL real-time PCR reaction with primers to detect the human miR-21. Norgen's Total RNA Purification Kit is the only product that showed (1) consistent detection of miR-21 transcripts across all input volumes, and (2) Ct values correlated to input volume (decrease Ct with increase input).

Figure 7. Recovering Diverse miRNA Species from Plasma with Better Consistency.

Norgen's Total RNA Purification Kit isolates plasma RNA that performs more consistently in downstream applications such as microarrays. Total RNA including miRNA was isolated from 100 µL of mouse plasma in duplicate using Norgen's Total RNA Purification Kit, Competitor 1's leading miRNA Kit or a phenol-based RNA extraction method. One hundred nanograms of extracted RNA from each kit was applied to an Illumina microRNA expression profiling kit. Scatter plots display better consistency (better clustering) of replicate signals from Norgen's samples. Genes with Pval < 0.01 for both replicates were in blue. The associated table suggested that Norgen's protocol recovered the same diversity of miRNA with better consistency (higher r² value).

Figure 8. Better Diversity of miRNA Detected from Plasma.

Norgen's Total RNA Purification Kit isolates miRNA from plasma with better diversity than a leading competitor. Total RNA including miRNA was isolated from 100 µL of plasma using Norgen's Total RNA Purification Kit or 625 µL of plasma using Competitor A's leading miRNA Kit, and was applied to an NCode expression profiling kit. Microarray images suggested that Norgen's Total RNA Purification Kit (left) isolates a better diversity of miRNA from smaller input amount of plasma than the competitor’s miRNA kit (right). Image courtesy of LC Sciences, Houston.

Figure 9. Better Diversity of miRNA Detected from HeLa Cells using Illumina Small RNA Next Gen Sequencing.

Norgen's Total RNA Purification Kit isolates miRNA from HeLa cells with better diversity than a leading competitor. Total RNA including miRNA was isolated from 1 million HeLa cells using Norgen's Total RNA Purification Kit and Competitor Q's leading miRNA Kit, and was applied to Illumina Small RNA Next Gen Sequencing on a MiSeq sequencer. Panel A showed that Norgen’s Total RNA Purification Kit recovers a higher number of miRNAs than the competitor. In particular, the higher diversity is achieved with a faster and simpler procedure in as little as 20 minutes of RNA sample preparation time without the use of phenol. Panel B is a scatter plot of the average RPM (reads per million) of the miRNAs detected used to compare Norgen and the competitor's kit recovery of miRNA. Norgen's Total RNA Purification Kit recovered a significantly higher number of miRNAs that have higher RPM, as summarized in the graph insert as well as in Panel C.

Figure 10. Consistent Yield of High Quality RNA with Complete Size Range without the Use of Phenol.

Norgen's Total RNA Purification 96-Well Kit allows for the consistent isolation of high quality RNA, with complete sizes ranging from very large RNA down to small RNA without the use of phenol. Total RNA was isolated from 0.5 mL aliquots of an overnight culture of *E. coli* (~5 x 10⁸ cells/mL) using Norgen's Total RNA Purification 96-Well Kit in 16 replicates. Five microliters of the 75 µL isolated RNA were resolved on a 1.2% formaldehyde agarose gel. All 16 replicates showed both high yield and high quality. In addition, all replicates showed effective recovery of all sizes of RNA including the small RNA (arrow).

Figure 13. Great Isolation Sensitivity.

Norgen's Total RNA Purification Kit allows for sensitive RNA extraction from even less than 10 cells. RT-qPCR was used to detect mRNA isolated from various input amounts of HeLa cells, from 100,000 down to a single cell, using Norgen's Total RNA Purification 96-Well Kit. Ten microliters of the 75 µL isolated RNA were then subjected to a 20 µL reverse transcription using oligo dT primers. Three microliters of the reverse transcription were used in a 20 µL real-time PCR reaction with primers to detect the human S15 transcripts. The resulting Ct values were plotted against the input cell number. Total RNA was isolated and detected linearly from as little as a single HeLa cell.

Figure 14. Comparison of total RNA concentration and RNA quality from HeLa cells isolated using column, automated bead-based, and manual bead-based purification methods.

RT-qPCR targeting microRNA-21 showed consistent Ct values (Columns: 21.66; Automation: 19.90; Manual: 19.91), confirming effective small RNA recovery with all three methods

Figure 15. RT-qPCR analysis of microRNA-21 to evaluate small RNA recovery from total RNA purified by different methods.

Total RNA isolated from HeLa cells using manual, automated, and column-based methods was reverse-transcribed and amplified for microRNA-21. All three methods provided comparable Ct values (Automation: 14.89; Columns: 15.48; Manual: 15.57), demonstrating effective and consistent small RNA recovery across platforms.

Figure 16. Total RNA integrity comparison using different purification methods from 1 × 10⁶ HeLa cells.

Total RNA was extracted using the Total RNA Purification Kit (Magnetic Bead System) (Product #75400) on three different platforms: Isopure, KingFisher, and the manual Column Kit method. Each lane was loaded with 5 µL of eluate and run on a 1× MOPS / 10% formaldehyde agarose gel to assess RNA integrity. Distinct 28S and 18S rRNA bands (indicated by arrows) demonstrate high-quality RNA across all platforms. The consistency in band intensity and sharpness suggests efficient RNA recovery and integrity across all methods tested.

Données justificatives

Figure 1. Haute qualité de l'ARN isolé avec une gamme complète de tailles. Contrairement à la plupart des kits concurrents, le kit de purification de l'ARN total de Norgen permet d'isoler toutes les tailles d'ARN, du très grand ARN au microARN, sans utiliser de phénol. L'ARN total a été isolé à partir de 1 x 109 cellules E. coli à l'aide du kit de purification de l'ARN total de Norgen et d'un kit concurrent. Cinq microlitres et 1 µL des 50 µL d'ARN isolé ont été analysés sur un gel d'agarose (panneau A) et sur la puce du bioanalyseur Agilent® 2100 RNA Nano 6000 (panneau B), respectivement. Noter la présence de petites espèces d'ARN (carré rouge) dans les échantillons isolés via le kit de Norgen et l'absence de ces espèces d'ARN dans la préparation d'ARN concurrent.

Figure 2. Amplification des petits et grands ARN dans la même extraction. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen permet d'isoler la gamme complète des tailles d'ARN, y compris les petits ARN, sans utiliser du phénol. L'ARN total a été isolé à partir de 0,75 million de cellules HeLa à l'aide du kit de purification de l'ARN total de Norgen, de divers concurrents à base de silice et du réactif TRI à base de phénol. La RT-PCR a été réalisée conformément à Shi et Chiang (2005). Quinze microlitres des 50 µL d'ARN isolé ont été polyadénylés dans une réaction Poly-(A)-Polymérase de 50 µL. Quatre microlitres d’ARN polyadénylé ont été utilisés dans une réaction de transcription inverse de 20 μL avec un amorce d’adaptateur polyT. Un microlitre de la transcription inverse a été utilisé dans une réaction qPCR de 20 µL avec des amorces contre les microARN humains (miR-19 et miR-21) et le grand ARNm (S15). Seule l'utilisation du kit de purification de l'ARN total de Norgen a permis de détecter à la fois des microARN et des produits d'amplification de l'ARNm, comme avec le kit du concurrent 2, mais sans utiliser de phénol.

Figure 3. Haute qualité de l'ARN à partir d'une gamme diversifiée de donnés. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen permet d'isoler l'ARN d'un large éventail d'espèces ou de types de tissus. L'ARN total a été isolé à partir de 5 x 108 cellules E. coli, 1 x 106 cellules HeLa, 100 µL de sang de rat et 10 mg de rein de hamster à l'aide du kit de purification de l'ARN total de Norgen. Un microlitre des 50 µL d'ARN isolé a été analysé sur le bioanalyseur Agilent® 2100 à l'aide d'une puce RNA Nano 6000. Note l'intégrité de l'ARN de toutes les entrées avec la présence de petites espèces d'ARN. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen permet d'isoler de manière cohérente un ARN de haute qualité à partir de divers intrants dont la valeur RIN est comprise entre 8 et 10.

Figure 4. Grande sensibilité à l’isolement. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen permet une extraction sensible de l'ARN à partir d'une seule cellule. L'ARN total a été extrait d'un nombre décroissant de cellules HEK 293, allant de 1 million de cellules à une seule cellule. Cinq microlitres des 50 µL d'ARN isolé ont ensuite été soumis à une transcription inverse de 20 µL en utilisant l'amorce oligo dT. Trois microlitres de la transcription inverse ont été utilisés dans une réaction PCR de 20 µL avec des amorces pour détecter les transcrits de la bêta-actine humaine. Des produits PCR de bêta-actine ont été détectés à partir d'une seule cellule. M est la ligne de démarcation.

Figure 5. Isolation linéaire et sensible des petits et grands ARN. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen permet d'isoler de manière cohérente les petits et les grands ARN à partir de différentes quantités d'intrants. L'ARN total a été isolé à partir de 10 à 100 000 cellules HeLa en utilisant le kit de purification de l'ARN total de Norgen (bleu), un kit à base de silice de concurrents (vert) et une méthode d'extraction de l'ARN à base de phénol (rouge). L'expression relative des miR-21 (panneau A) et S15 (panneau B) a été déterminée par RT-qPCR à partir d'échantillons d'ARN total. En bref, un microlitre des 50 µL d'ARN isolé a ensuite été soumis à une transcription inverse de 20 µL en utilisant l'amorce inverse de la boucle de tige miR-21 ou l'amorce oligo dT. Deux microlitres de la transcription inverse ont été utilisés dans une réaction PCR en temps réel de 20 µL avec des amorces pour détecter le miR-21 humain (panneau A) et les transcrits S15 (panneau B). Les valeurs de cycle seuil (Ct) qui en résultent ont été tracées en fonction du nombre de cellules d'entrée. L'ARN isolé à l'aide de Norgen's Total RNA Purification présentait la meilleure linéarité (R2 plus élevé) et la meilleure sensibilité (Ct plus bas) à la fois pour le grand ARN (S15) et le petit ARN (miR-21).

Figure 6. Détection efficace et cohérente des ARN micro dans le plasma. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen permet d'isoler efficacement l’ARN micro du plasma. L'ARN total a été isolé à partir de 50, 100 ou 200 µL de plasma de rat en trois exemplaires en utilisant le kit de purification de l'ARN total de Norgen (bleu), un kit à base de silice de concurrents (vert) et une méthode d'extraction de l'ARN à base de phénol (rouge). Une RT-qPCR en boucle de tige utilisant des amorces spécifiques à miR-21 a été réalisée. En bref, deux microlitres des 50 µL d'ARN isolé ont ensuite été soumis à une transcription inverse de 20 µL en utilisant l'amorce inverse de la boucle de tige miR-21 ou l'amorce oligo dT. Trois microlitres de la transcription inverse ont été utilisés dans une réaction PCR en temps réel de 20 µL avec des amorces pour détecter le miR-21 humain. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen est le seul produit qui a montré (1) une détection cohérente des transcrits miR-21 pour tous les volumes d'entrée, et (2) des valeurs de Ct en corrélation avec le volume d'entrée (diminution de Ct avec l'augmentation de l'entrée).

Figure 7. Récupération de diverses espèces d’ARN micro dans le plasma avec une meilleure cohérence. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen permet d'isoler l'ARN plasmatique qui est plus performant dans les applications en aval telles que les puces à ADN. L'ARN total, y compris les ARN micro, a été isolé à partir de 100 µL de plasma de souris en double en utilisant le kit de purification de l'ARN total de Norgen, le principal kit d'ARN micro du concurrent 1 ou une méthode d'extraction de l'ARN à base de phénol. Cent nanogrammes d'ARN extrait de chaque kit ont été appliqués à un kit de profilage de l'expression des ARN micro d'Illumina. Les diagrammes de dispersion montrent une meilleure cohérence (meilleur regroupement) des signaux répétés des échantillons de Norgen. Les gènes dont la Pval < 0,01 pour les deux répétitions sont en bleu. Le tableau associé a suggéré que le protocole de Norgen a récupéré la même diversité d’ARN micro avec une meilleure cohérence (valeur r2 plus élevée).

Figure 8. Meilleure diversité des ARN micro détectés dans le plasma. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen isole les ARN micro du plasma avec une meilleure diversité qu'un concurrent de premier plan. L'ARN total incluant les ARN micro a été isolé à partir de 100 µL de plasma à l'aide du kit de purification de l'ARN total de Norgen ou de 625 µL de plasma à l'aide du principal kit ARN micro du concurrent A, et a été appliqué à un kit de profilage d'expression NCode. Les images de biopuces suggèrent que le kit de purification de l'ARN total de Norgen (à gauche) isole une meilleure diversité d’ARN micro à partir d'une plus petite quantité de plasma que le kit ARN micro concurrent (à droite). Avec l'aimable autorisation de LC Sciences, Houston.

Figure 9. Meilleure diversité des ARN micro détectés dans les cellules HeLa à l'aide du séquençage de la prochaine génération des petits ARN d'Illumina. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen isole les ARN micro des cellules HeLa avec une meilleure diversité qu'un concurrent éminent. L'ARN total, y compris les ARN micro, a été isolé à partir d'un million de cellules HeLa à l'aide du kit de purification de l'ARN total de Norgen et du kit ARN micro de Competitor Q. Il a ensuite été utilisé pour le séquençage de la prochaine génération des petits ARN d'Illumina sur un séquenceur MiSeq. Le panneau A montre que le kit de purification de l'ARN total de Norgen récupère un plus grand nombre d’ARN micro que son concurrent. En particulier, la plus grande diversité est obtenue grâce à une procédure plus rapide et plus simple, en seulement 20 minutes de temps de préparation de l'échantillon d'ARN, sans utilisation de phénol. Le panneau B est un diagramme de dispersion de la moyenne des LPM (lectures par million) des ARN micro détectés, utilisé pour comparer la récupération des ARN micro par Norgen et par les kits concurrents. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen a récupéré un nombre significativement plus élevé d’ARN micro ayant des LPM plus élevées, comme le résument le graphique et le panneau C.

Figure 10. Rendement constant d'ARN de haute qualité avec une gamme complète de tailles sans utilisation de phénol.. Le kit de purification de l'ARN total 96 puits de Norgen permet d'isoler de manière cohérente un ARN de haute qualité, avec des tailles complètes allant de l'ARN de très grande taille à l'ARN de petite taille, sans utiliser de phénol. L'ARN total a été isolé à partir d'aliquotes de 0,5 mL d'une culture d'E. coli d'une nuit (~5 x 108 cellules/mL) à l'aide du kit de purification de l'ARN total à 96 puits de Norgen, en 16 répétitions. Cinq microlitres des 75 µL d'ARN isolé ont été résolus sur un gel d'agarose à 1,2 % de formaldéhyde. Les 16 répétitions ont montré un rendement et une qualité élevés. En outre, toutes les répétitions ont montré une récupération efficace de toutes les tailles d'ARN, y compris le petit ARN (flèche).

Figure 11. Haute qualité de l'ARN à partir d'une gamme diversifiée d'intrants.Le kit de purification de l'ARN total 96 puits de Norgen permet d'isoler l'ARN d'un large éventail d'espèces et de types de tissus. L'ARN total a été isolé à partir de 8 mg de cerveau (voies A), de rein (voies B), de foie (voies C), de poumon (voies D) et de tissu de rate (voies E), de 7,5 x 105 cellules HeLa (voies F) et CHO (voies G), et de 5 x 108 bactéries (voies H) à l'aide du kit de purification de l'ARN total à 96 puits de Norgen. Cinq microlitres des 75 µL d'ARN isolé ont été résolus sur un gel d'agarose à 1,2 % de formaldéhyde. L'observation du gel de formaldéhyde-agarose montre que le kit de Norgen peut être utilisé pour isoler avec succès l'ARN total, y compris les petites espèces d'ARN, à partir d'un large éventail de types d'échantillons.

Figure 12. Isolement des petits et grands ARN. Le kit de purification de l'ARN total 96 puits de Norgen permet d'isoler de manière cohérente les petits et les grands ARN.L'ARN total a été isolé à partir d'échantillons de 5 x 105 cellules HeLa à l'aide du kit de purification de l'ARN total à 96 puits de Norgen. Des aliquotes de chaque échantillon d'ARN total ont ensuite été utilisées dans deux réactions différentes de RT-qPCR. Dix microlitres des 75 µL d'ARN isolé ont été soumis à une transcription inverse de 20 µL en utilisant l'amorce inverse de la boucle souche de miR-21 ou l'oligo dT. Trois microlitres de la transcription inverse ont été utilisés dans une réaction PCR en temps réel de 20 µL avec des amorces pour détecter le miR-21 humain (panneau A) et les transcrits S15 (panneau B), respectivement. L'ARNm et l’ARN micro ont été amplifiés de manière cohérente à partir de tous les échantillons, avec une faible variabilité des valeurs Ct. Ainsi, les deux types d'ARN sont régulièrement isolés à l'aide de ce kit.

Figure 13. Grande sensibilité à l'isolement.Le kit de purification de l'ARN total de Norgen permet une extraction sensible de l'ARN à partir de moins de 10 cellules. La RT-qPCR a été utilisée pour détecter l'ARNm isolé à partir de différentes quantités de cellules HeLa, de 100 000 à une seule cellule, à l'aide du kit de purification de l'ARN total à 96 puits de Norgen. Dix microlitres des 75 µL d'ARN isolé ont ensuite été soumis à une transcription inverse de 20 µL à l'aide d'amorces oligo dT. Trois microlitres de la transcription inverse ont été utilisés dans une réaction PCR en temps réel de 20 µL avec des amorces pour détecter les transcrits S15 humains. Les valeurs Ct obtenues ont été tracées en fonction du nombre de cellules d'entrée. L'ARN total a été isolé et détecté de manière linéaire à partir d'une seule cellule HeLa.

Spécifications du kit

Capacité de liaison maximale

Jusqu'à 50 μg d'ARN

Volume de chargement maximal

650 μL

Taille de l'ARN purifié

Toutes les tailles, y compris les petits ARN (< 200 nt)

Quantité maximale de matériel de départ

Cellules animales

3 x 10⁶ cellules

Tissus animaux

10 mg (pour la plupart des tissus*)

Sang

100 μL

Plasma/sérum

200 μL

Bactéries

1 x 10⁹ cellules

Levure

1 x 10⁸ cellules

Champignons

50 mg

Plasma/Serum

50 mg

Temps nécessaire pour effectuer 10 purifications

20 minutes

Rendement moyen

Cellules HeLa (1 x 10⁶cellules) E. coli (1 x 10⁹cellules)	15 μg 50 μg

*pour isoler l'ARN total à partir de plus grandes quantités de tissus, veuillez utiliser le kit de purification de l'ARN des tissus animaux de Norgen (Cat #25700).

Conditions de stockage et stabilité du produit
Toutes les solutions doivent être maintenues hermétiquement fermées et conservées à température ambiante. Ces kits sont stables pendant 2 ans après la date d'expédition.

Documentation

Alternate formats available upon request by emailing info@norgenbiotek.com. Such requests shall be made:

in a timely manner that considers the person's accessibility needs due to disability; and
at a cost that is no more than the regular cost charged to other persons

Kit de purification de l'ARN total

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