不含血浆/血清细胞的循环 DNA 纯化试剂盒
用于快速、轻松地从血浆/血清样品中纯化循环游离 DNA
不含血浆/血清细胞的循环 DNA 纯化试剂盒
用于快速、轻松地从血浆/血清样品中纯化循环游离 DNA
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概述
这些试剂盒提供了一种快速、可靠、方便的自旋转柱方法，可从血浆/血清样本中分离出优质、高纯度、无抑制剂的无细胞循环 DNA (cfc-DNA)。纯化的血浆/血清 cfc-DNA 与所有下游应用完全兼容，包括 PCR、qPCR、甲基化敏感聚合酶链式反应和 Southern 印迹分析、微阵列和 NGS。
背景
血浆/血清中的无细胞循环 DNA（cfc-DNA）有可能为某些癌症和疾病以及母体血液中的胎儿 DNA 提供生物标记。目前，利用 cfc-DNA 作为生物标志物，用于多种癌症和自身免疫性疾病的早期诊断、预后和治疗监测方面取得了重大进展。无细胞线粒体 DNA (cfmtDNA) 的临床意义也在研究之中。这种 cfc-DNA 通常是小于 1000 bp 的短片段。此外，无细胞胎儿 DNA 已被广泛用作产前诊断的无创方法，包括早期鉴定胎儿性别、对遗传性疾病高风险家庭进行基因研究、恒河猴因子筛查、非整倍体筛查和子痫前期鉴定
血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化微型试剂盒
适用于处理 10 μL 至 200 μL 的初始血浆/血清量。该试剂盒可从新鲜或冷冻血浆/血清样本中分离出各种大小的 cfc-DNA，纯化后的 DNA 会被洗脱到 25 µL 至 50 µL 的灵活洗脱体积中。
血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化迷你试剂盒
适用于处理 200 μL 至 500 μL 的初始血浆/血清量。该试剂盒可从新鲜或冷冻血浆/血清样本中分离出各种大小的 cfc-DNA，纯化后的 DNA 会被洗脱到 25 µL 至 50 µL 的灵活洗脱体积中。
血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Midi 试剂盒
适用于处理 1 mL - 4 mL 初始血浆/血清量。第一个色谱柱将处理大量输入的体液，然后在迷你色谱柱上进行浓缩，最终洗脱 25 µL 至 50 µL 的体液
血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Maxi 试剂盒
适用于处理 5 mL-10 mL 初始血浆/血清量。第一个色谱柱将处理大量输入的体液，然后在迷你色谱柱上进行浓缩，最终洗脱 25 µL 至 50 µL 的体液
细节
支持数据
图 1.Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化微型试剂盒用于从 50 µL、100 µL 和 200 µL 的血浆中纯化循环 DNA，这些血浆是用柠檬酸盐作为抗凝剂采集的。然后将 2 μL 纯化 DNA 用作 q 聚合酶链式反应的模板，以评估纯化的管家 5S rRNA 基因的相对含量。5S rRNA 基因的相对含量随样本输入量的增加而线性增加。与其他分离方法相比，Norgen 的试剂盒对管家 5S rRNA 基因的回收最稳定，回收率也最高。
图 2.Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化微型试剂盒用于从 50 µL、100 µL 和 200 µL 的血浆中纯化循环 DNA。然后将 2 μL 纯化 DNA 用作 q 聚合酶链式反应的模板，以评估不同血浆容量中纯化的管家 5S rRNA 基因的线性度。Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化微型试剂盒能够从 100 µL 血浆中回收 96% 的 5S rRNA 基因，而 50 µL 血浆中的含量仅为 96%。此外，与 100 µL 血浆中的含量相比，从 200 µL 血浆中回收了 97% 的 5S rRNA 基因。
图 3.使用 Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化微试剂盒从 50 µL、100 µL 和 200 µL 血浆中分离 DNA。在 20 升 q 聚合酶链式反应中使用的洗脱液体积（2、4 和 8 升）不断增加，以观察 Ct 值是否下降。随着模板量的增加，Ct 值也会增加，这清楚地表明样本中存在聚合酶链式反应抑制剂。增加 qPCR 中用作模板的洗脱体积并不会影响 qPCR 生成的 Ct 值，事实上，Ct 值往往会随着聚合酶链式反应输入体积的增加而降低，这表明使用 Norgen 试剂盒从血浆中纯化的 DNA 不含血浆中常见的抑制剂。
图 4.与竞争对手 Q 的试剂盒相比，Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化迷你试剂盒用于从 200 µL、300 µL 和 400 µL 的血浆中纯化循环 DNA。然后将 2 μL 纯化 DNA 用作 q 聚合酶链式反应的模板，以评估纯化的管家 5S rRNA 基因的相对含量。5S rRNA 基因的相对含量随样本输入量的增加而线性增加。与其他分离方法相比，Norgen 的试剂盒方法对看家 5S rRNA 基因的回收最稳定，回收率也最高。
图 5.Norgen 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化迷你试剂盒用于从 200 µL、300 µL 和 400 µL 的血浆中纯化循环 DNA。然后将 2 μL 纯化 DNA 用作 q 聚合酶链式反应的模板，以评估不同血浆容量中纯化的管家 5S rRNA 基因的线性度。相对于 200 µL 血浆中的含量，Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化迷你试剂盒能够从 300 µL 血浆中回收 98% 的 5S rRNA 基因。此外，与 300 µL 血浆中的含量相比，从 400 µL 血浆中回收了 98% 的 5S rRNA 基因。
图 6.使用 Norgen 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化迷你试剂盒从 200 µL、300 µL 和 400 µL 血浆中分离 DNA。在 20 升 q 聚合酶链式反应中使用的洗脱液体积（2、4 和 8 升）不断增加，以观察 Ct 值是否下降。随着模板量的增加，Ct 值也会增加，这清楚地表明样本中存在聚合酶链式反应抑制剂。qPCR 中用作模板的洗脱体积的增加并不影响 qPCR 生成的 Ct 值，事实上，Ct 值有随着聚合酶链式反应输入体积的增加而降低的趋势，这表明使用 Norgens 试剂盒从血浆中纯化的 DNA 不含血浆中常见的抑制剂。
图 7.从不同体积的血浆中纯化无细胞循环 DNA。与竞争对手 Q 的试剂盒相比，Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Midi 试剂盒用于从 0.5 mL、1 mL、2 mL 和 4 mL 血浆中纯化循环 DNA，这些血浆采用柠檬酸盐作为抗凝剂收集的血液制备而成。然后将 2 μL 纯化 DNA 用作 q 聚合酶链式反应的模板，以评估纯化的管家 5S rRNA 基因的相对含量。5S rRNA 基因的相对含量随样本输入量的增加而线性增加。与其他分离方法相比，Norgen 试剂盒对管家 5S rRNA 基因的回收最稳定，回收率也最高。
图 8.使用 Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Midi 试剂盒从增加的血浆体积中纯化 DNA 的线性度。Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Midi 试剂盒用于纯化 0.5 mL、1 mL、2 mL 和 4 mL 血浆中的循环 DNA，这些血浆采用柠檬酸盐作为抗凝剂收集的血液制备而成。然后将 2 μL 纯化 DNA 用作 q 聚合酶链式反应的模板，以评估不同血浆容量中纯化的管家 5S rRNA 基因的线性度。Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Midi 试剂盒能够从 1 mL 血浆中回收 97% 的 5S rRNA 基因，而 0.5 mL 血浆中的回收率仅为 97%。此外，相对于 1 mL 血浆中的含量，从 2 mL 血浆中可回收 95% 的 5S rRNA 基因。此外，与 2 mL 血浆中的含量相比，从 4 mL 血浆中回收了 95% 的 5S rRNA 基因。
图 9.在检测人类 5S 基因时，确定无血浆细胞循环 DNA 样本中的抑制量。使用 Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Midi 试剂盒从 0.5 mL、1 mL、2 mL 和 4 mL 血浆中分离 DNA。在 20 µL q 聚合酶链式反应中使用的洗脱液体积不断增加（2、4 和 8 µL），以观察 Ct 值是否下降。随着模板量的增加，Ct 值也会增加，这清楚地表明样本中存在聚合酶链式反应抑制剂。增加 qPCR 中用作模板的洗脱体积并不会影响 qPCR 生成的 Ct 值，事实上，Ct 值有随着聚合酶链式反应输入体积的增加而降低的趋势，这表明使用 Norgens 试剂盒从血浆中纯化的 DNA 不含通常存在于血浆中的常见抑制剂。
图 10.与竞争对手 Q 的试剂盒相比，Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Maxi 试剂盒用于从 5 mL、8 mL 和 10 mL 的血浆中纯化循环 DNA，这些血浆是用柠檬酸盐作为抗凝剂采集的。然后将两毫升纯化 DNA 用作 q 聚合酶链式反应的模板，以评估纯化的管家 5S rRNA 基因的相对含量。5S rRNA 基因的相对含量随样本输入量的增加而线性增加。与其他分离方法相比，Norgen 的试剂盒对管家 5S rRNA 基因的回收最稳定，回收率也最高。
图 11.Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Maxi 试剂盒用于纯化 5 mL、8 mL 和 10 mL 血液中的循环 DNA。然后将两毫升纯化 DNA 用作 q 聚合酶链式反应的模板，以评估不同血浆容量中纯化的管家 5S rRNA 基因的线性度。Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Maxi 试剂盒能够从 8 mL 血浆中回收 94% 的 5S rRNA 基因，而 5 mL 血浆中的含量仅为 94%。此外，相对于 10 mL 血浆中的含量，从 10 mL 血浆中回收了 96% 的 5S rRNA 基因。
图 12.使用Norgens 血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化 Maxi 试剂盒从 5 mL、8 mL 和 10 mL 血浆中分离 DNA。在 20 µL q 聚合酶链式反应中使用的洗脱液体积不断增加（2、4 和 8 µL），以观察 Ct 值是否下降。随着模板量的增加，Ct 值也会增加，这清楚地表明样本中存在聚合酶链式反应抑制剂。qPCR 中用作模板的洗脱体积的增加并不影响 qPCR 生成的 Ct 值，事实上，Ct 值有随着聚合酶链式反应输入体积的增加而降低的趋势，这表明使用 Norgens 试剂盒从血浆中纯化的 DNA 不含血浆中常见的抑制剂。
| 试剂盒规格 | |
| 最小等离子体/血清输入 | 10 μL |
| 最大血浆/血清输入量 | 200 μL |
| 纯化的 DNA 大小 | ≥ 50 bp |
| 洗脱体积 | 25-50 μL |
| 完成 10 次净化所需的时间 | 15-20 分钟 |
| 平均产量* | 视标本而定 |
*请查看产品手册第 7 页，了解血浆/血清平均产量和常用 DNA 定量方法。
储存条件和产品稳定性
所有溶液都应密封保存在室温下。该试剂盒自发货之日起 2 年内保持稳定。试剂盒中含有即用型蛋白酶 K，它溶解在专门配制的储存缓冲液中。缓冲蛋白酶 K 在室温下保存可在发货日期后 2 年内保持稳定。
(55100) Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Kits - Protocol (50 Preps)
(55600) Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Kits - Protocol (20 Preps)
(55800) Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Kits - Protocol (10 Preps)