总 RNA 纯化试剂盒 - 旋转柱

图 2.在同一提取物中同时扩增大分子和小分子 RNA。Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒无需使用苯酚即可分离出完整大小范围的 RNA，包括小 RNA。使用 Norgen 总 RNA 纯化试剂盒、各种硅胶竞争剂和苯酚 TRI 试剂从 75 万个 HeLa 细胞中分离出总 RNA。RT-PCR 按照 Shi 和 Chiang（2005 年）的方法进行。从 50 µL 中分离出来的 15 µL 的 RNA 在 50 µL Poly-(A)-Polymerase 反应中进行多聚腺苷酸化。在 20 µL 的反转录反应中使用了 4 µL 多聚腺苷酸化的 RNA，并使用了 poly T 适应子引物。在 20 µL q 聚合酶链式反应中使用了 1 µL 的反转录产物，并使用了针对人类 microRNA（miR-19 和 miR-21）和大 mRNA（S15）的引物。只有使用 Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒才能检测到 microRNA 和 mRNA 扩增产物，与竞争对手 2 的试剂盒类似，但不使用苯酚。

图 3.从各种输入中获得优质 RNA。Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒可从多种物种或组织类型中分离 RNA。使用 Norgen 总 RNA 纯化试剂盒从 5 x 108 个大肠杆菌细胞、1 x 106 个 HeLa 细胞、100 µL 大鼠血液和 10 mg 仓鼠肾脏中分离出总 RNA。在 Agilent® 2100 生物分析仪上使用 RNA Nano 6000 芯片对从 50 µL 中分离出来的 1 µL 的 RNA 进行分析。注意所有输入的 RNA 都是完整的，但存在小 RNA 物种。Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒能从 RIN 值在 8 到 10 之间的各种输入物中持续分离出优质 RNA。

图 4.极大的隔离灵敏度。Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒可从单个细胞中灵敏提取 RNA。从 293 HEK 细胞（从 100 万个细胞到单个细胞）中提取总 RNA。然后用寡聚 dT 引物对从 50 µL 中分离出来的 5 µL 的 RNA 进行 20 µL 反转录。在 20 µL 聚合酶链式反应中使用了 3 µL 反转录液和引物，以检测人 β 肌动蛋白转录本。只要一个细胞就能检测到 β 肌动蛋白的聚合酶链式反应产物。M 是标记泳道。

图 5.线性、灵敏地分离大分子和小分子 RNA。Norgens 总 RNA 纯化试剂盒可从不同的输入量中稳定地分离出大 RNA 和小 RNA。使用 Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒（蓝色）、基于竞争对手硅胶的试剂盒（绿色）和基于苯酚的 RNA 提取方法（红色）从 10 到 100,000 个 HeLa 细胞中分离出总 RNA。通过总 RNA 样本的 RT-qPCR 测定 miR-21（A 组）和 S15（B 组）的相对表达。简言之，从 50 µL 分离的 RNA 中取 1 µL ，使用 miR-21 茎环反向引物或 oligo dT 引物进行 20 µL 反转录。在 20 µL 实时聚合酶链式反应中使用了 2 µL 的反转录产物和引物，以检测人类 miR-21（A 组）和 S15 转录物（B 组）。得出的阈值周期 (Ct) 值与输入细胞数相对应。对于大 RNA (S15) 和小 RNA (miR-21)，使用 Norgen 总 RNA 纯化技术分离的 RNA 具有最佳的线性度（R2 较高）和灵敏度（Ct 较低）。

图 6.从血浆中有效、一致地检测 miRNA。Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒能有效地从血浆中分离 miRNA。使用 Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒（蓝色）、基于竞争对手硅胶的试剂盒（绿色）和基于苯酚的 RNA 提取方法（红色），从 50、100 或 200 µL 大鼠血浆中分离出总 RNA，每次分离三份。使用 miR-21 的特异性引物进行了干环 RT-q 聚合酶链式反应。简言之，从 50 µL 分离出的 RNA 中取 2 µL ，使用 miR-21 茎环反向引物或 oligo dT 引物进行 20 µL 反转录。在 20 µL 的实时聚合酶链式反应中使用了 3 µL 的反转录产物和引物来检测人类 miR-21。Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒是唯一能显示 (1) 在所有输入量下都能一致检测到 miR-21 转录本，以及 (2) Ct 值与输入量相关（输入量增加，Ct 值降低）的产品。

图 7.以更好的一致性从血浆中回收多种 miRNA。Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒分离出的血浆 RNA 在微阵列等下游应用中表现更稳定。使用 Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒、竞争对手 1 的主要 miRNA 试剂盒或基于苯酚的 RNA 提取方法，从 100 µL 小鼠血浆中分离出包括 miRNA 在内的总 RNA，一式两份。每个试剂盒提取的 100 ng RNA 被用于 Illumina microRNA 表达谱分析试剂盒。散点图显示 Norgen 样本的重复信号具有更好的一致性（更好的聚类）。两次重复中 Pval 均小于 0.01 的基因用蓝色表示。相关表格显示，Norgen 的方案恢复了同样多样性的 miRNA，而且一致性更好（r2值更高）。

图 8.从血浆中检测到的 miRNA 更具多样性。Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒能从血浆中分离出 miRNA，其多样性优于主要竞争对手。使用 Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒从 100 µL 的血浆中分离出包括 miRNA 的总 RNA，或使用竞争对手 A 的领先 miRNA 试剂盒从 625 µL 的血浆中分离出总 RNA，并将其应用于 NCode 表达谱分析试剂盒。微阵列图像显示，与竞争对手的 miRNA 试剂盒（右图）相比，Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒（左图）能从较少的血浆输入量中分离出更多样的 miRNA。图片由休斯顿 LC Sciences 提供。

图 9.利用 Illumina Small RNA 下一代测序技术提高从 HeLa 细胞中检测到的 miRNA 的多样性。Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒能从 HeLa 细胞中分离出 miRNA，其多样性优于主要竞争对手。使用 Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒和 竞争对手 Q 的领先 miRNA 试剂盒从 100 万个 HeLa 细胞中分离出包括 miRNA 在内的总 RNA，并将其应用于 MiSeq 测序仪上的 Illumina Small RNA 下一代测序。面板 A 显示，诺健总 RNA 纯化试剂盒回收的 miRNA 数量高于竞争对手。特别是，在不使用苯酚的情况下，只需 20 分钟的 RNA 样本制备时间，就能以更快、更简单的程序实现更高的多样性。B 组是检测到的 miRNA 平均 RPM（百万读数）散点图，用于比较 Norgen 和竞争对手试剂盒的 miRNA 回收率。Norgens 总 RNA 纯化试剂盒回收的具有较高 RPM 的 miRNA 数量明显较多，如插图和面板 C 所示。

图 10.无需使用苯酚，即可获得稳定的优质 RNA，且大小范围齐全。Norgen 的总 RNA 纯化 96 孔试剂盒可以稳定地分离出优质 RNA，从超大 RNA 到小 RNA，粒度齐全，无需使用苯酚。使用 Norgen 的总 RNA 纯化 96 孔试剂盒，从大肠杆菌（约 5 x108个细胞/mL）过夜培养物的 0.5 mL 等分样本中分离总 RNA，重复 16 次。在 1.2% 甲醛琼脂糖凝胶上从 75 µL 中分离出来的 5 µL 的 RNA。所有 16 个重复均显示出高产和优质。此外，所有重复均显示有效回收了所有大小的 RNA，包括小 RNA（箭头）。

图 11.从各种输入中获得优质 RNA。Norgen 的总 RNA 纯化 96 孔试剂盒可从多种物种和组织类型中分离 RNA。使用 Norgen 总 RNA 纯化 96 孔试剂盒从 8 mg 脑组织（A 泳道）、肾组织（B 泳道）、肝组织（C 泳道）、肺组织（D 泳道）和脾组织（E 泳道）、7.5 x105 HeLa 细胞（F 泳道）和 CHO 细胞（G 泳道）以及 5 x108个细菌（H 泳道）中分离总 RNA。在 1.2% 甲醛琼脂糖凝胶上从 75 µL 中分离出来的 5 µL 的 RNA。通过观察甲醛-琼脂糖凝胶可以看出，Norgen 试剂盒可用于从多种类型的样本中成功分离总 RNA，包括小 RNA 物种。

图 12.大 RNA 和小 RNA 的分离。Norgen 的总 RNA 纯化 96 孔试剂盒可以稳定地分离大 RNA 和小 RNA。使用 Norgen 的总 RNA 纯化 96 孔试剂盒从 5 x105 个 HeLa 细胞样本中分离出总 RNA。然后将每个总 RNA 样本的等分样本用于 2 个不同的 RT-q 聚合酶链式反应。用 miR-21 茎环反向引物或 oligo dT 对从 75 µL 中分离出来的 10 µL 的 RNA 进行 20 µL 反转录。在 20 µL 的实时聚合酶链式反应中使用 3 µL 的反转录物，引物分别用于检测人类 miR-21（A 组）和 S15 转录本（B 组）。所有样本的 mRNA 和 microRNA 扩增结果一致，Ct 值的变异性较低。因此，使用该试剂盒可以持续分离出这两种类型的 RNA。

图 13.极高的隔离灵敏度Norgen 的总 RNA 纯化试剂盒可从少于 10 个细胞中灵敏提取 RNA。使用 Norgen 的总 RNA 纯化 96 孔试剂盒，用 RT-qPCR 检测从不同输入量的 HeLa 细胞（从 100,000 个细胞到单个细胞）中分离出来的 mRNA。然后用寡聚 dT 引物对从 75 µL 中分离出来的 10 µL 的 RNA 进行 20 µL 反转录。在 20 µL 的实时聚合酶链式反应中使用了 3 µL 的反转录物，并使用引物检测人类 S15 转录本。得出的 Ct 值与输入的细胞数相对应。从单个 HeLa 细胞中分离并线性检测总 RNA。