用于简单、非侵入性地采集唾液并在室温下保存唾液样本中的 DNA
唾液 DNA 采集和保存设备
用于简单、非侵入性地采集唾液并在室温下保存唾液样本中的 DNA
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概述
Norgen 的唾液 DNA 采集和保存设备设计用于:1) 简单、无创的唾液采集;2) 在环境温度下保存唾液样本中的 DNA。50 个唾液 DNA 采集和保存装置中的每个装置都由 3 个部件组成:(1) 唾液采集漏斗和采集管,(2) 采集管盖,(3) 密封可挤压安瓿中的 Norgen 唾液 DNA 保存剂。唾液样本的采集方法是将唾液吐在与采集管组装在一起的采集漏斗内。采集所需体积的唾液后,取出采集漏斗,然后加入保存剂安瓿中的内容物并与采集的唾液混合。随后,唾液采集管被送往实验室进行 DNA 分离和分析。可使用 Norgen 的唾液 DNA 分离试剂盒(类别号:RU45400)从保存的唾液样本中分离 DNA。Norgen 的每个采集管都标有唯一的序列号,可用于对样本进行安全、匿名追踪。保存样本中的唾液 DNA 在室温下可稳定保存 2 年以上。该试剂盒非常适合采集和保存用于流行病学和人口研究的 DNA 样本。
唾液 DNA 保存剂
Norgen 的唾液 DNA 保存剂是一种水性储存缓冲液,设计用于快速裂解细胞并随后保存新鲜样本中的 DNA。缓冲液可防止革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌和真菌的生长,还能使病毒失活,从而使产生的非感染性样本得以安全处理和运输。此外,该缓冲液无需立即处理或冷冻样本,可在环境温度下将样本运送到集中检测设施。缓冲液的成分可使样本保存 2 年以上而不会检测到任何 DNA 降解。
从保存剂中分离 DNA
在分离唾液 DNA 之前,先将装有保存唾液的采集管涡旋 10 秒钟,然后在 55°C 温 度下培养 1 小时。现在,可以使用任何市售方法从保存的唾液样本中分离唾液 DNA,包括 Norgen 的唾液 DNA 分离试剂盒(类别号:RU45400)、Norgen 的唾液 DNA 分离 96 孔试剂盒(类别号:RU45400)和 Norgen 的唾液 DNA 分离 96 孔试剂盒(类别号:RU45400)。RU35200)和 Norgen 的唾液 DNA 分离试剂盒(磁珠系统)(类别号:RU55400、RU62900)。此外,Norgen 的唾液 DNA 分离试剂盒(最多 4 mL)(类别号:RU35720)可以使用酒精沉淀法从保存的唾液样本中分离 DNA。纯化后的 DNA 质量上乘,可用于多种下游应用,包括 PCR、NGS 和微阵列分析。
细节
Supporting Data
Figure 1. Stability of DNA Preserved in Norgen's Saliva DNA Preservative at Room Temperature for up to 75 Months.
Saliva samples were collected from numerous donors and mixed, and then an equal volume of Norgen's Saliva DNA Preservative was added to the saliva. The preserved saliva was then stored at room temperature for up to 75 months. Saliva DNA was subsequently isolated at 1 week, 3 weeks, 1 month, 2 months, 4 months, 6 months, 8 months, 12 months, 20 months, 32 months, 40 months, 52 months and 75 months from 0.5 mL of the saliva/preservative sample using Norgen's Saliva DNA Isolation Kit (Cat. RU45400). For visual analysis, 100 µL of the purified DNA was run on an agarose TAE gel. As it can be seen, there is no evidence of DNA degradation after the saliva samples are stored for 75 months at ambient temperatures in Norgen's Saliva DNA Preservative. Furthermore, the size of the DNA was maintained over 24 kb for the entire 75-month period. M: Norgen's UltraRanger 1 Kb DNA Ladder (Cat. 12100).
Figure 2. GAPDH Real Time PCR Amplification of Saliva DNA from Saliva Samples Stored at Room Temperature from Day 0 up to 24 Months.
All isolated saliva DNA samples were successfully amplified without any sign of PCR inhibition and difference in Ct. Red: Day 0, Blue: 4 months, Purple: 8 months, Green: 16 months and Sky blue: 24 months. Black: No template control.
Figure 3. V3-V4 16s rRNA PCR amplification for Illumina MiSeq 16s rRNA library preparation.
The saliva DNA was isolated using Norgen's Saliva DNA Isolation Kit (Cat. RU45400) from saliva that had been preserved for various periods of time up to 2 years at room temperature in Norgen’s Saliva DNA Preservative. The PCR result shows the clean PCR amplification at ~550 bp indicating the right target of V3-V4 16s rRNA , with no difference between day 0 and 24 months. M: FastRunner DNA Ladder (Cat. 12800).
支持数据
图 1.诺健唾液 DNA 保存中保存剂的 DNA 在室温下的稳定性超过 2 年。从众多捐献者处采集唾液样本并混合,然后在唾液中加入等量的 Norgen 唾液 DNA 保存剂。然后将保存的唾液在室温下储存长达 24 个月。随后,在 4 个月、8 个月、16 个月和 24 个月时,使用 Norgen 的唾液 DNA 分离试剂盒(类别号:RU45400)从 0.5 mL 唾液/保存剂样本中分离唾液 DNA。为了进行直观分析,将 100 µL 纯化的 DNA 在琼脂糖 TAE 凝胶上运行。可以看出,唾液样本在诺健唾液 DNA 保存剂中常温保存 24 个月后,DNA 没有降解迹象。此外,在整个 24 个月期间,DNA 的大小一直保持在 24 kb 以上。M:Norgen 的 UltraRanger 1 Kb DNA Ladder(类别号:12100)。
图 2.从室温下保存第 0 天至 24 个月的唾液样本中进行唾液 DNA 的 GAPDH 实时聚合酶链式反应扩增。所有分离的唾液 DNA 样本都成功扩增,没有出现任何聚合酶链式反应抑制迹象和 Ct 值差异。红色:第 0 天,蓝色:4 个月,紫色:8 个月,绿色:16 个月,天蓝色:24 个月。黑色:无模板控制。
图 3.用于制备 Illumina MiSeq 16s rRNA 文库的 V3-V4 16s rRNA聚合酶链式反应扩增。唾液 DNA 使用 Norgen 唾液 DNA 分离试剂盒(类别号:RU45400)的唾液,这些唾液在 Norgens 唾液 DNA 保存剂中室温保存了不同时间,最长可达 2 年。PCR 结果显示,在 ~550 bp 处的聚合酶链式反应扩增干净利落,表明 V3-V4 16s rRNA 的目标正确,在第 0 天和第 24 个月之间没有差异。M:FastRunner DNA Ladder(类别号:12800)
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E试剂盒规格
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采集的唾液量
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2 mL
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唾液-保存剂混合液体积
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4 mL
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保存温度
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室温
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| 保存时间 |
室温下 2 年以上
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保质期和处理
- 在室温下储存时,未使用的 Norgen 唾液保存剂试管可稳定地保存至保质期,其性能不会降低。请参阅设备说明书或试管标签上的保质期。
- 唾液采集后,如果密封并在室温下保存,可稳定保存 2 年以上。
- 每个唾液 DNA 采集和保存装置的采集管、采集漏斗和装置容器均可回收。
Documentation
- in a timely manner that considers the person's accessibility needs due to disability; and
- at a cost that is no more than the regular cost charged to other persons