细胞质/核 RNA 纯化

图 2.超强分离 HeLa 细胞的细胞质和核 RNA。与竞争对手的主要产品相比，Norgen 的细胞质和核 RNA 纯化试剂盒能更好地从 0.8 百万 HeLa 细胞中分离出细胞质和核 RNA。A 组：使用 Norgen 试剂盒和竞争对手的试剂盒从 HeLa 细胞中纯化的细胞质和细胞核 RNA。在 1.5% 甲醛-琼脂糖凝胶上分别取 10 µL 细胞质（C）或细胞核（N）RNA 的 50 µL 洗脱液（Norgen 或竞争对手试剂盒）。使用 Norgen 试剂盒分离出的 RNA 产率更高，完整性更好。B 组：用 Norgen 试剂盒和竞争对手试剂盒从 HeLa 细胞中分离出 10 μL 的细胞质和细胞核 RNA，在 0.9% 琼脂糖凝胶上检测。基因组 DNA 只与使用诺健细胞质与核 RNA 纯化试剂盒分离的 RNA 中的核部分发生共迁移，而不与细胞质部分发生共迁移。请注意，我们提供了可选的柱上 DNase 处理方案，以去除核馏分中的基因组 DNA。与此相反，使用竞争对手试剂盒分离的 RNA 的细胞质部分出现了严重的基因组 DNA 污染。

图 3.不含基因组 DNA 的细胞质 RNA。使用 Norgen 的细胞质与核 RNA 纯化试剂盒从 100 万个 HeLa 细胞中分离出 50 µL 的细胞质 RNA，使用人β 肌动蛋白引物对其中的 2 µL 进行 RT-PCR 扩增。M 泳道是 Norgen 的聚合酶链式反应Sizer DNA 梯子，泳道 1 和 3 是阴性对照（仅 PCR，无反向转录），2 和 4 泳道是实际 RT-PCR，显示预期的 166 bp RT-PCR 产物。基因拷贝的预期扩增片段大小与 RNA 转录本相同。1 和 3 泳道中没有产物，说明分离的细胞质 RNA 中没有基因组 DNA 污染。所有聚合酶链式反应产物均在 1X TAE、2% 琼脂糖凝胶上分离。

图 4.细胞质和核转录本的特异性分离和后续扩增。Norgen 的细胞质和核 RNA 纯化试剂盒能有效分离细胞质和核 RNA。使用 Norgen 的细胞质与核 RNA 纯化试剂盒从 100 万个 HeLa 细胞中分离出 0.5 µg 的细胞质或核 RNA 产物，使用人 U2 snRNA（A 组）或 S14（B 组）引物进行 RT-PCR。在面板 A 中，当使用核特异性 U2 snRNA 引物时，仅在核部分观察到强烈的聚合酶链式反应产物。在 B 组中，在细胞质部分观察到了 S14 的看家转录本的大部分聚合酶链式反应产物。这两项结果表明，使用 Norgen 的细胞质和核 RNA 纯化试剂盒可以有效分离细胞质和核 RNA。所有聚合酶链式反应产物均在 1X TAE、1.5% 琼脂糖 DNA 凝胶上分离。