总 RNA 纯化试剂盒 - 旋转柱 附加试剂盒
用于纯化总 RNA（包括 microRNA）并快速去除 gDNA
总 RNA 纯化试剂盒 - 旋转柱 附加试剂盒
用于纯化总 RNA（包括 microRNA）并快速去除 gDNA
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概述
该试剂盒可从生物样本中纯化包括 miRNA 在内的总 RNA，并采用额外的色谱柱有效去除污染的 gDNA，从而取代了酶解 DNase 步骤。
从细胞、细菌、酵母、病毒等一系列样本以及血浆/血清、血液、唾液、脑脊液等体液中有效提取总 RNA。提取优质、高纯度的 RNA，其 RIN 值和 A260/A280 均非常出色，适用于 qRT-PCR、RT-PCR、微阵列、NGS 等下游应用。
该试剂盒可在同一馏分中纯化各种大小的 RNA，从大 mRNA、lncRNA 到 microRNA (miRNA)，无需使用苯酚。以相同的速度分离所有 RNA 序列，而不论其大小。此外，当 RNA 序列较小（如 miRNA）时，无论其 GC 含量如何，色谱柱都能与小 RNA 结合。
细节
支持数据
图 1.从 HeLa 细胞中提取基因组 DNA。Norgen 的总 RNA 纯化增强试剂盒的独特之处在于它含有基因组 DNA 去除柱，无需使用酶即可去除 gDNA。HeLa 细胞要么通过 gDNA 去除柱，要么未经过 gDNA 去除处理。基因组 DNA 去除柱成功去除了 100 万个 HeLa 细胞（图 A）和1x105个 HeLa 细胞（图 B）中的 gDNA。对于面板 A 和面板 B，左图显示的是在 1.2% EtBR-琼脂糖凝胶上检测的 RNA，以便更好地观察任何 gDNA 污染。右图显示的是 1.0% 甲醛-琼脂糖凝胶，以便更好地变性样本中的 RNA。对于较高的输入量，如图 A 所示，基因组 DNA 去除柱的 RNA 产量也高于未经处理的样本。
图 2.不同 gDNA 去除技术的 Delta Ct 值。众所周知，基因组 DNA 会污染 RNA 样本，进而污染 RT-qPCR 结果。因此，要确定 RNA 样本中基因组 DNA 的污染量，可以使用 RT-qPCR 来比较 RNA 样本反转录和未反转录时观察到的 Ct 值。这就是所谓的 Delta Ct。将 100 万个和 1x105个 HeLa 细胞通过 gDNA 移除柱，或使用 Norgen 的 RNase-Free DNase I（类别号：25710）进行 DNase 处理。gDNA 去除柱消除 gDNA 的效果与 DNase 处理类似。对于较高的输入量（如 100 万个 HeLa 细胞），gDNA 去除柱从 RNA 样本中成功去除的 gDNA 污染多于 DNase 处理。当输入量降低时，经 DNase 处理的样本中基因组 DNA 污染量与通过 gDNA 去除柱的样本相似。这两种方法都能很好地去除 RNA 样本中的 gDNA 污染。
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试剂盒规格
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每个色谱柱的最大结合能力
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高达 50 μg RNA
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每个旋转柱的最大装载量
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650 μL
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纯化的 RNA 大小
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所有大小，包括 < 200 nt
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| 完成 10 次净化所需时间 |
25 分钟
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起始材料的最大用量
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肝组织
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20 mg
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心脏组织
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5 mg
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肾组织
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20 mg
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脑组织
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25 mg
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| 肺组织 |
20 mg
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脾组织
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20 mg
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全血
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100 µL
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Hela 细胞
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3 x 106
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| CHO |
3 x 106
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| 酵母 |
1 x 108 个细胞
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| 大肠杆菌 |
1 x 109 CFU/mL
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| 细菌 | 1 x 109 个细胞 | ||
| 血浆/血清 | 200 µL | ||
| 真菌 |
50 mg
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| 植物组织 |
50 mg
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| 病毒 |
≤100 µL 病毒悬浮液
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平均产量
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所有溶液都应密封保存在室温下。该试剂盒在发货后 1 年内保持稳定。