Dispositivos de recogida y conservación de ARN de la saliva Dx

Descripción general del producto

Los dispositivos de recogida y conservación de ARN en saliva Dx de Norgen están diseñados para 1) la auto-recogida segura y no invasiva de muestras de saliva y 2) la conservación del ARN en muestras de saliva a temperatura ambiente. Cada uno de los 50 Dispositivos de Recogida y Conservación de ARN de Saliva Dx consta de 3 componentes: (1) Embudo de recogida de saliva y tubo de recogida, (2) tapón del tubo de recogida y (3) conservante de ARN de saliva Norgen contenido en una ampolla sellada que se puede apretar. La recogida de saliva se realiza a través de una auto-recolección supervisada. Las muestras de saliva se recogen escupiendo dentro del embudo de recogida que se ha ensamblado con el tubo de recogida. Después de recoger el volumen necesario de saliva, se retira el embudo de recogida y se añade el contenido de la ampolla de conservante y se mezcla con la saliva recogida. El tubo de recogida de saliva se envía posteriormente al laboratorio para el aislamiento y análisis del ARN. El ARN puede aislarse de las muestras de saliva conservadas utilizando los kits de purificación de ARN de saliva/ hisopo Dx de Norgen (Cat# Dx69100, Dx69300). Cada uno de los tubos de recogida de Norgen está etiquetado con un número de serie único que puede utilizarse para un seguimiento seguro y anónimo de la muestra. El ARN de saliva de las muestras conservadas es estable hasta 2 meses a temperatura ambiente. Este kit es ideal para recoger y conservar muestras de ARN para uso diagnóstico in vitro con fines médicos. Este kit puede utilizarse para recoger y conservar ARN viral, incluido el ARN de SARs-CoV-2 para la detección de COVID-19.

Los dispositivos de recogida y conservación de ARN de saliva Dx de Norgen no proporcionan un resultado diagnóstico. Es responsabilidad exclusiva del usuario utilizar y validar estos dispositivos junto con un ensayo de diagnóstico in vitro posterior.

CONSERVANTE DEL ARN DE LA SALIVA

El conservante de ARN de saliva de Norgen es un tampón de almacenamiento acuoso diseñado para la lisis celular rápida y la posterior conservación del ARN de muestras de saliva fresca. El tampón elimina la necesidad de procesar o congelar inmediatamente las muestras y permite enviarlas a las instalaciones de pruebas centralizadas a temperatura ambiente. Los componentes del tampón permiten conservar las muestras hasta 2 meses a temperatura ambiente. El conservante de ARN de saliva también inactiva todas las bacterias, levaduras y virus presentes en la muestra de saliva.

AISLAMIENTO DE ÁCIDOS NUCLEICOS A PARTIR DE CONSERVANTE

El ARN de saliva puede aislarse de las muestras de saliva conservadas utilizando los kits de purificación de ARN de saliva/hisopo Dx de Norgen (Cat# Dx69100, Dx69300). Para minimizar las irregularidades en los resultados del diagnóstico, deben utilizarse controles adecuados para las aplicaciones posteriores.

Detalles

Datos de respaldo

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Figura 1. Estabilidad del ARN conservado en el conservante de ARN de saliva de Norgen a temperatura ambiente durante un máximo de 2 meses. Se recogieron muestras de saliva de numerosos donantes, se mezclaron y, a continuación, se añadió a la saliva un volumen igual de conservante de ARN salival de Norgen. A continuación, la saliva conservada se almacenó a temperatura ambiente durante un máximo de 2 meses. Posteriormente, se aisló el ARN de la saliva en el día 0, día 4, día 6, día 16, 1 mes y 2 meses a partir de 0,25 mL de la muestra de saliva/conservante utilizando el protocolo suplementario asociado al kit de purificación de ARN total de Norgen (Cat. 17200). Para el análisis visual, 7,5 µl de 50 µl de elución se mezclaron con colorante de carga de ARN y se corrieron en un gel de agarosa MOPS1x. La integridad del ARN se mantuvo después de que las muestras de saliva se conservaran hasta 2 meses a temperatura ambiente en conservante de ARN de saliva de Norgen.

Figura 2. Estabilidad de tres genes de mantenimiento durante un periodo de 2 meses. Los genes GAPDH, ARNr 18S humano y beta actina se monitorizaron a partir de muestras de saliva almacenadas a temperatura ambiente en el conservante de ARN de saliva de Norgen. Se aisló el ARN de 250 µl de muestras conservadas el día 0, el día 4, el día 6, el día 10, el día 16, el día 30 y el día 60 utilizando el kit de purificación de ARN total de Norgen (Cat. 17200). A continuación, se utilizaron 4 µl de elución en 20 µl de la reacción de PCR en tiempo real (SYBR Green I) utilizando el sistema de detección de PCR en tiempo real CFX96 TouchTM (Bio-Rad). Todos los genes se conservaron y se mantuvieron estables durante 2 meses.

Figura 3. El conservante de ADN de saliva de Norgen es capaz de preservar con éxito muestras de ARN de saliva cuando se utiliza fuera del rango ideal de 1:1 a temperatura ambiente durante 3 días. A medida que la cantidad de saliva añadida a 2 mL de conservante de ARN salival aumentaba de 0,2 mL a 3 mL, se controló la estabilidad del ARN mediante RT-PCR de un paso de la proteína RNasa y el gen β-actina. Los resultados indicaron que la variación de los volúmenes de entrada de saliva no influyó significativamente en la detección del gen ARN.

Figura 4. Detección de ARN viral, bacteriano y humano a partir de muestras de saliva conservadas. La saliva (2 mL) recogida de un único donante sano se mezcló con 2 mL de conservante de ARN de saliva. Control positivo COVID-19 de Norgen del kit 2019-nCoV TaqMan RT-PCR (gen E/RdRP) (Cat. TM67200) en la saliva conservada junto con células HeLa (1,6 m células /ml ) para generar una muestra artificial. A partir de la muestra artificial, se purificó el ARN total utilizando el kit de purificación de ARN total de Norgen (Cat. 17200) y 5 genes (16s ARNr, gen COVID-19 E, genes RdRP-P1 y P2 y RP) fueron analizados por PCR o RT-PCR para detectar genes virales, bacterianos y humanos.

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