Método rápido y sencillo para la recogida, conservación y envío de muestras de heces
Tubos de recogida y conservación de ácidos nucleicos en heces
Método rápido y sencillo para la recogida, conservación y envío de muestras de heces
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Descripción general del producto
Los tubos de recogida y conservación de ácidos nucleicos en heces de Norgen están diseñados para la rápida conservación de ácidos nucleicos de muestras de heces frescas. Los tubos de recogida y conservación de ácidos nucleicos en heces contienen el conservante de heces de Norgen en formato líquido. El usuario simplemente recoge las heces en los tubos (llenar hasta la línea indicada en el tubo) y mezcla suavemente hasta que las heces estén bien sumergidas bajo el conservante. El conservante de heces impide el crecimiento de bacterias y hongos gramnegativos y grampositivos, y también inactiva los virus, lo que permite manipular y enviar con seguridad las muestras no infecciosas resultantes. Además, el conservante de heces elimina la necesidad de procesar o congelar inmediatamente las muestras y permite enviarlas a instalaciones de análisis centralizadas a temperatura ambiente. Los componentes del conservante de heces permiten conservar las muestras a temperatura ambiente durante más de 2 años para el ADN y 7 días para el ARN. Para prolongar la estabilidad del ARN fecal en el conservante, se recomienda almacenarlo a -20°C o -70°C al llegar a las instalaciones de pruebas hasta la purificación del ARN.
Detalles
Supporting Data
Figure 2. Norgen's Best-In-Class Preservation.
Summary of community shifts in response to stabilizing solutions over a 14-day storage period. Bray-Curtis distance towards the reference for each patient grouped by stabilizing solution. Median and 5th-to-95th percentile ranges are shown for both interaliquot and interpatient variability (adapted from Plauzolles et al, 2022). Norgen is the most similar to frozen stool samples, over 11 other sample collection and storage methods.
Figure 1. Integrity of Total Stool DNA and RNA Isolated from Preserved Stool Samples.
DNA and RNA were isolated from 200 µL of preserved stool from 4 different donors (lanes A to D) stored at room temperature at the indicated time points (DNA at 27 months and RNA at 7 days) using Norgen's Stool Nucleic Acid Isolation Kit (Cat# 45600). Next, 10 µL from the 75 µL eluted nucleic acid was loaded onto a gel for visual analysis. High integrity stool DNA was isolated from preserved stool samples that were stored at room temperature for 27 months, and high integrity RNA was isolated from stool samples stored for 7 days at ambient temperature. Lane M is Norgen's HighRanger 1 kb DNA Ladder (Cat. 11900).
Figure 3. Monitoring the DNA stability of Adenovirus (Ad5subE1) Spiked into Preserved Stool Samples using TaqMan Real-Time PCR Assay.
Preserved stool samples were spiked with 6 x 109 pfu/mL of Adenovirus, and 200 µL samples were removed at the indicated time points. The stool DNA was then isolated using Norgen's Stool DNA Isolation Kit (Cat# 27600). Next, 2 µL of DNA template from each 50 µL of elution was used in a 20 µL PCR reaction to detect the Adenovirus DNA. The stool preservative was shown to stabilize Adenovirus DNA up to 21 weeks at ambient temperature, indicating that Norgen's Stool Nucleic Acid Collection and Preservation Tubes provide a safe and convenient sample transportation system.
Figure 4. Hierarchical Clustering of Stool Samples at Phylum Level Under Different Storage Conditions.
The microbial composition from the stool samples preserved in Norgen’s Stool Nucleic Acid Collection and Preservation Tubes (Cat. 45630, 45660) did not differ significantly to that of controls (fresh stool from Day 0 at RT) over a 2 day period while non-preserved stool samples showed a distance in the dendrogram from the original stool profile.
Figure 5. Difference In Top 5 Abundant Microorganisms at Phylum Level Compared to Fresh Stool (Day 0).
Abundance of Firmicuties, Bacteroidetes and proteobacteria from the preserved stool sample was higher than non-preserved (NP) to the fresh stool after 2 days storage at RT, indicating that the originality of microorganism profile from the preserved are much closer to the fresh stool sample (Day 0).
Figure 6. Relative Abundance of Bacterial Genera Between Preserved And Non-preserved Stool Sample Stored at RT For 2 Days.
Preserved stool sample using Norgen’s Stool Nucleic Acid Collection and Preservation Tubes (Cat. 45630, 45660) showed closed relativeness to the fresh stool sample (Day 0).
Figure 7. Correlation between duplicate bacterial metagenomic reads.
Correlation between duplicate bacterial metagenomic reads using (A) Fresh stool (day 0) and preserved stool at RT for 2 days and (B) Fresh stool (day 0) and non-preserved stool at RT for 2 days. A greater R2 was observed for Fresh stool (day 0) and preserved stool, suggestive of higher consistency between fresh stool sample and preserved stool sample
Datos de respaldo
Figura 1. La mejor conservación de Norgen. Resumen de los cambios de la comunidad en respuesta a las soluciones estabilizadoras durante un periodo de almacenamiento de 14 días. Distancia de Bray-Curtis hacia la referencia para cada paciente agrupado por solución estabilizadora. Se muestran la mediana y los intervalos del percentil 5 al 95 tanto para la variabilidad entre alícuotas como entre pacientes (adaptado de Plauzolles et al, 2022). Norgen es el más similar a las muestras de heces congeladas, por encima de otros 11 métodos de recogida y almacenamiento de muestras.
Figura 2. Integridad del ADN y el ARN fecales totales aislados de muestras de heces conservadas. El ADN y el ARN se aislaron a partir de 200 µl de heces conservadas de 4 donantes diferentes (líneas A a D) almacenadas a temperatura ambiente en los puntos temporales indicados (ADN a los 27 meses y ARN a los 7 días) utilizando el Kit de Aislamiento de Ácido Nucleico en Heces de Norgen (Cat. nº 45600). A continuación, 10 µl de los 75 µl de ácido nucleico eluido se cargaron en un gel para su análisis visual. Se aisló ADN de heces de alta integridad a partir de muestras de heces conservadas que se almacenaron a temperatura ambiente durante 27 meses, y se aisló ARN de alta integridad a partir de muestras de heces almacenadas durante 7 días a temperatura ambiente. El carril M es HighRanger 1 kb DNA Ladder de Norgen (Cat. #11900).
Figura 3. Seguimiento de la estabilidad del ADN de adenovirus (Ad5subE1) introducido en muestras de heces conservadas mediante el ensayo de PCR TaqMan en tiempo real. Las muestras de heces conservadas se enriquecieron con 6 x 109 ufp/mL de adenovirus y se extrajeron 200 µl de muestras en los momentos indicados. A continuación, se aisló el ADN fecal utilizando el kit de aislamiento de ADN fecal de Norgen (Cat# 27600). A continuación, se utilizaron 2 µl de molde de ADN de cada 50 µl de elución en una reacción de PCR de 20 µl para detectar el ADN de adenovirus. Se demostró que el conservante de heces estabiliza el ADN de adenovirus hasta 21 semanas a temperatura ambiente, lo que indica que los tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen proporcionan un sistema de transporte de muestras seguro y cómodo.
Figura 4. Agrupación jerárquica de muestras de heces a nivel de filo en diferentes condiciones de almacenamiento. La composición microbiana de las muestras de heces conservadas en tubos Norgens de recogida y conservación de ácido nucleico en heces (Cat. 45630, 45660) no difirieron significativamente de la de los controles (heces frescas del Día 0 a RT) durante un período de 2 días, mientras que las muestras de heces no conservadas mostraron un distanciamiento en el dendrograma del perfil original de las heces.
Figura 5. Diferencia en los 5 microorganismos más abundantes a nivel de filo en comparación con las heces frescas (día 0). La abundancia de Firmicuties, Bacteroidetes y proteobacterias de la muestra de heces conservadas fue superior a la de las heces no conservadas (NP) a las heces frescas después de 2 días de almacenamiento a temperatura ambiente, lo que indica que la originalidad del perfil de microorganismos de las heces conservadas es mucho más parecida a la de las heces frescas (día 0).
Figura 6. Abundancia relativa de géneros bacterianos entre muestras de heces conservadas y no conservadas almacenadas a temperatura ambiente durante 2 días. Muestra de heces conservada utilizando los Tubos de Recogida y Conservación de Ácidos Nucleicos en Heces de Norgen (Cat. 45630, 45660) mostraron una relatividad cerrada con la muestra de heces frescas (Día 0).
Figura 7. Correlación entre lecturas bacterianas metagenómicas duplicadas utilizando (A) heces frescas (día 0) y heces conservadas a RT durante 2 días y (B) heces frescas (día 0) y heces no conservadas a RT durante 2 días. Se observó un R2 mayor para las heces frescas (día 0) y las heces conservadas, lo que sugiere una mayor consistencia entre la muestra de heces frescas y la muestra de heces conservadas.
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Especificaciones del kit
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Entrada de heces
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2 g
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| Estabilidad de los ácidos nucleicos fecales a temperatura ambiente |
2 años para el ADN, 7 días para el ARN*
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* La estabilidad del ARN variará en función de las muestras
Condiciones de almacenamiento y estabilidad del producto
Todos los tubos deben conservarse herméticamente cerrados y almacenados a temperatura ambiente (15 - 25°C) hasta 2 años sin que disminuya su rendimiento.
Documentation
- in a timely manner that considers the person's accessibility needs due to disability; and
- at a cost that is no more than the regular cost charged to other persons