Tubos de recogida y conservación de ácidos nucleicos en heces

Figura 2. Integridad del ADN y el ARN fecales totales aislados de muestras de heces conservadas. El ADN y el ARN se aislaron a partir de 200 µl de heces conservadas de 4 donantes diferentes (líneas A a D) almacenadas a temperatura ambiente en los puntos temporales indicados (ADN a los 27 meses y ARN a los 7 días) utilizando el Kit de Aislamiento de Ácido Nucleico en Heces de Norgen (Cat. nº 45600). A continuación, 10 µl de los 75 µl de ácido nucleico eluido se cargaron en un gel para su análisis visual. Se aisló ADN de heces de alta integridad a partir de muestras de heces conservadas que se almacenaron a temperatura ambiente durante 27 meses, y se aisló ARN de alta integridad a partir de muestras de heces almacenadas durante 7 días a temperatura ambiente. El carril M es HighRanger 1 kb DNA Ladder de Norgen (Cat. #11900).

Figura 3. Seguimiento de la estabilidad del ADN de adenovirus (Ad5subE1) introducido en muestras de heces conservadas mediante el ensayo de PCR TaqMan en tiempo real. Las muestras de heces conservadas se enriquecieron con 6 x 109 ufp/mL de adenovirus y se extrajeron 200 µl de muestras en los momentos indicados. A continuación, se aisló el ADN fecal utilizando el kit de aislamiento de ADN fecal de Norgen (Cat# 27600). A continuación, se utilizaron 2 µl de molde de ADN de cada 50 µl de elución en una reacción de PCR de 20 µl para detectar el ADN de adenovirus. Se demostró que el conservante de heces estabiliza el ADN de adenovirus hasta 21 semanas a temperatura ambiente, lo que indica que los tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen proporcionan un sistema de transporte de muestras seguro y cómodo.

Figura 4. Agrupación jerárquica de muestras de heces a nivel de filo en diferentes condiciones de almacenamiento. La composición microbiana de las muestras de heces conservadas en tubos Norgens de recogida y conservación de ácido nucleico en heces (Cat. 45630, 45660) no difirieron significativamente de la de los controles (heces frescas del Día 0 a RT) durante un período de 2 días, mientras que las muestras de heces no conservadas mostraron un distanciamiento en el dendrograma del perfil original de las heces.

Figura 5. Diferencia en los 5 microorganismos más abundantes a nivel de filo en comparación con las heces frescas (día 0). La abundancia de Firmicuties, Bacteroidetes y proteobacterias de la muestra de heces conservadas fue superior a la de las heces no conservadas (NP) a las heces frescas después de 2 días de almacenamiento a temperatura ambiente, lo que indica que la originalidad del perfil de microorganismos de las heces conservadas es mucho más parecida a la de las heces frescas (día 0).

Figura 6. Abundancia relativa de géneros bacterianos entre muestras de heces conservadas y no conservadas almacenadas a temperatura ambiente durante 2 días. Muestra de heces conservada utilizando los Tubos de Recogida y Conservación de Ácidos Nucleicos en Heces de Norgen (Cat. 45630, 45660) mostraron una relatividad cerrada con la muestra de heces frescas (Día 0).

Figura 7. Correlación entre lecturas bacterianas metagenómicas duplicadas utilizando (A) heces frescas (día 0) y heces conservadas a RT durante 2 días y (B) heces frescas (día 0) y heces no conservadas a RT durante 2 días. Se observó un R2 mayor para las heces frescas (día 0) y las heces conservadas, lo que sugiere una mayor consistencia entre la muestra de heces frescas y la muestra de heces conservadas.