Kits de purificación de ADN circulante libre de células de plasma/suero

Descripción general del producto

Estos kits proporcionan un método de columna de centrifugación rápido, fiable y cómodo para el aislamiento de ADN circulante libre de células (cfc-ADN) de alta calidad, alta pureza y libre de inhibidores a partir de volúmenes de muestra de plasma/suero. El cfc-ADN purificado de plasma/suero es totalmente compatible con todas las aplicaciones posteriores, incluyendo PCR, qPCR, PCR sensible a la metilación y análisis Southern Blot, microarrays y NGS.

Antecedentes

El ADN circulante libre de células en plasma/suero (cfc-ADN) tiene el potencial de proporcionar biomarcadores para determinados cánceres y estados patológicos, así como el ADN fetal en sangre materna. En la actualidad, se están realizando avances significativos en la utilización del cfc-ADN como biomarcadores para el diagnóstico precoz, el pronóstico y el seguimiento de la terapia de varios tipos de cáncer y enfermedades autoinmunes. También se está investigando la importancia clínica del ADN mitocondrial libre de células (cfmtADN). Este cfc-ADN suele estar presente en forma de fragmentos cortos de menos de 1000 pb. Además, el ADN fetal libre de células se ha utilizado ampliamente como método no invasivo para el diagnóstico prenatal, incluida la identificación precoz del sexo fetal, los estudios genéticos para familias con alto riesgo de trastornos genéticos hereditarios, el cribado del factor Rhesus, el cribado de aneuploidías y la identificación de la preeclampsia.

Kit de purificación de ADN circulante libre de células de plasma/suero Micro

Ideal para manipular volúmenes iniciales de plasma/suero que oscilan entre 10 μL y 200 μL. El kit está diseñado para aislar todos los tamaños de cfc-ADN a partir de muestras de plasma/suero fresco o congelado y el ADN purificado se eluye en un volumen de elución flexible que oscila entre 25 µl y 50 µl.

Kit de purificación de ADN circulante libre de células de plasma/suero Mini

Ideal para manipular volúmenes iniciales de plasma/suero que oscilan entre 200 μL y 500 μL. El kit está diseñado para aislar todos los tamaños de cfc-ADN a partir de muestras de plasma/suero fresco o congelado y el ADN purificado se eluye en un volumen de elución flexible que oscila entre 25 µl y 50 µl.

Kit de purificación de ADN circulante libre de células de plasma/suero Midi

Ideal para manejar volúmenes iniciales de plasma/suero de 1 mL a 4 mL. La primera columna se encargará de la entrada de un gran volumen de fluidos corporales, seguida de una concentración en una minicolumna para una elución final de 25 µl a 50 µl.

Kit de purificación de ADN circulante libre de células de plasma/suero Maxi

Ideal para manejar volúmenes iniciales de plasma/suero de 5 mL- 10 mL. La primera columna se encargará de la entrada de un gran volumen de fluidos corporales, seguida de una concentración en una minicolumna para una elución final de 25 µl a 50 µl.

Detalles

Supporting Data

Figure 1 / 12

Figure 1. Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Micro Kit was used to purify circulating DNA from 50 µL, 100 µL and 200 µL plasma prepared from blood collected on citrate as an anticoagulant, and compared to Competitor Q's kit.

Two microlitres of the purified DNA was then used as the template in qPCR reactions to assess the relative amount of the purified housekeeping 5S rRNA gene. The relative amount of the 5S rRNA gene increases linearly with increasing the sample input volume. Norgen's kit showed the most consistent and the highest recovery of the housekeeping 5S rRNA gene as compared to the other isolation method.

Figure 2. Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Micro Kit as used to purify circulating DNA from 50 µL, 100 µL and 200 µL plasma prepared from blood collected on citrate as an anticoagulant.

Two microlitres of the purified DNA was then used as the template in qPCR reactions to assess the linearity of the purified housekeeping 5S rRNA gene from the different plasma volumes. Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Micro Kit was able to recover 96% of the 5S rRNA gene from 100 µL plasma relative to the amount that is present in 50 µL plasma. Moreover, 97% of the 5S rRNA gene was recovered from 200 µL plasma relative to the amount that is present in 100 µL plasma.

Figure 3. DNA was isolated from 50 µL, 100 µL and 200 µL plasma using Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Micro Kit.

Increasing volumes of the elution (2, 4 and 8 μL) were used in a 20 μL qPCR reaction to observe any decrease in Ct value. An increase in Ct values with increasing amount of template would be a clear indication of PCR inhibitors present in the sample. An increase in elution volume used as a template in the qPCR did not affect the Ct value generated from qPCR and in fact the Ct values tend to decrease with increasing the PCR input volume indicating that DNA purified from plasma using Norgen's kit is free of the common inhibitors usually present in plasma.

Figure 4. Purification of DNA from different plasma volumes using Mini Kit.

Norgen's Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Mini Kit was used to purify circulating DNA from 200 µL, 300 µL and 400 µL plasma prepared from blood collected on citrate as an anticoagulant in comparison to Competitor Q's kits. Two microlitres of the purified DNA was then used as the template in qPCR reactions to assess the relative amount of the purified housekeeping 5S rRNA gene. The relative amount of the 5S rRNA gene increases linearly with increasing the sample input volume. Norgen's kit showed the most consistent and the highest recovery of the housekeeping 5S rRNA gene as compared to the other isolation method.

Figure 5. Linearity of DNA purified from increasing plasma volumes using Mini Kit.

Norgen's Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Mini Kit was used to purify circulating DNA from 200 µL, 300 µL and 400 µL plasma prepared from blood collected on citrate as an anticoagulant. Two microlitres of the purified DNA was then used as the template in qPCR reactions to assess the linearity of the purified housekeeping 5S rRNA gene from the different plasma volumes. Norgen's Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Mini Kit was able to recover 98% of the 5S rRNA gene from 300 µL plasma relative to the amount that is present in 200 µL plasma. Moreover, 98% of the 5S rRNA gene was recovered from 400 µL plasma relative to the amount that is present in 300 µL plasma.

Figure 6. Detection of the human 5S gene using Mini Kit.

DNA was isolated from 200 µL, 300 µL and 400 µL plasma using Norgen's Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Mini Kit. Increasing volumes of the elution (2, 4 and 8 μL) were used in a 20 μL qPCR reaction to observe any decrease in Ct value. An increase in Ct values with increasing amount of template would be a clear indication of PCR inhibitors present in the sample. An increase in elution volume used as a template in the qPCR did not affect the Ct value generated from qPCR and in fact the Ct values tend to decrease with increasing the PCR input volume indicating that DNA purified from plasma using Norgen’s kit is free of the common inhibitors usually present in plasma.

Figure 7. Purification of cell-free circulating DNA from different plasma volumes.

Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Midi Kit was used to purify circulating DNA from 0.5 mL, 1 mL, 2 mL and 4 mL plasma prepared from blood collected on citrate as an anticoagulant in comparison to Competitor Q's kits. Two microlitres of the purified DNA was then used as the template in qPCR reactions to assess the relative amount of the purified housekeeping 5S rRNA gene. The relative amount of the 5S rRNA gene increases linearly with increasing the sample input volume. Norgen's Kit showed the most consistent and the highest recovery of the housekeeping 5S rRNA gene as compared to the other isolation method.

Figure 8. Linearity of DNA purified from increasing plasma volumes using Norgen’s Plasma/Serum cell-free circulating DNA Purification Midi Kit.

Norgen’s Plasma/Serum cell-free circulating DNA Purification Midi Kit was used to purify circulating DNA from 0.5 mL, 1 mL, 2 mL and 4 mL plasma prepared from blood collected on citrate as an anticoagulant. Two microlitres of the purified DNA was then used as the template in qPCR reactions to assess the linearity of the purified housekeeping 5S rRNA gene from the different plasma volumes. Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Midi Kit was able to recover 97% of the 5S rRNA gene from 1 mL plasma relative to the amount that is present in 0.5 mL plasma. Moreover, 95% of the 5S rRNA gene was recovered from 2 mL plasma relative to the amount that is present in 1 mL plasma. Additionally, 95% of the 5S rRNA gene was recovered from 4 mL plasma relative to the amount that is present in 2 mL plasma.

Figure 9. Determination of the amount of inhibition present in plasma cell-free circulating DNA samples when detecting the human 5S gene.

DNA was isolated from 0.5 mL, 1 mL, 2 mL and 4 mL plasma using Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Midi Kit. Increasing volumes of the elution (2, 4 and 8 µL) were used in a 20 µL qPCR reaction to observe any decrease in Ct value. An increase in Ct values with increasing amount of template would be a clear indication of PCR inhibitors present in the sample. An increase in elution volume used as a template in the qPCR did not affect the Ct value generated from qPCR, and in fact the Ct values tend to decrease with increasing the PCR input volume indicating that DNA purified from plasma using Norgen’s kit is free of the common inhibitors usually present in plasma.

Figure 10. Norgen's Plasma/Serum cell-free circulating DNA Purification Maxi Kit was used to purify circulating DNA from 5 mL, 8 mL and 10 mL plasma prepared from blood collected on citrate as an anticoagulant in comparison to Competitor Q's kits.

Two milliliters of the purified DNA was then used as the template in qPCR reactions to assess the relative amount of the purified housekeeping 5S rRNA gene. The relative amount of the 5S rRNA gene increases linearly with increasing the sample input volume. Norgen's kit showed the most consistent and the highest recovery of the housekeeping 5S rRNA gene as compared to the other isolation method.

Figure 11. Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Maxi Kit was used to purify circulating DNA from 5 mL, 8 mL and 10 mL plasma prepared from blood collected on citrate as an anticoagulant.

Two milliliters of the purified DNA was then used as the template in qPCR reactions to assess the linearity of the purified housekeeping 5S rRNA gene from the different plasma volumes. Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Maxi Kit was able to recover 94% of the 5S rRNA gene from 8 mL plasma relative to the amount that is present in 5 mL plasma. Moreover, 96% of the 5S rRNA gene was recovered from 10 mL plasma relative to the amount that is present in 10 mL plasma.

Figure 12. DNA was isolated from 5 mL, 8 mL and 10 mL plasma using Norgen’s Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Maxi Kit.

Increasing volumes of the elution (2, 4 and 8 µL) were used in a 20 µL qPCR reaction to observe any decrease in Ct value. An increase in Ct values with increasing amount of template would be a clear indication of PCR inhibitors present in the sample. An increase in elution volume used as a template in the qPCR did not affect the Ct value generated from qPCR and in fact the Ct values tend to decrease with increasing the PCR input volume indicating that DNA purified from plasma using Norgen’s kit is free of the common inhibitors usually present in plasma.

Datos de respaldo

Figura 1. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Micro de Norgen se utilizó para purificar ADN circulante de 50 µL, 100 µL y 200 µL de plasma preparado a partir de sangre extraída con citrato como anticoagulante, y se comparó con el kit Q de la competencia. A continuación, se utilizaron dos microlitros del ADN purificado como molde en las reacciones qPCR para evaluar la cantidad relativa del gen 5S ARNr purificado. La cantidad relativa del gen 5S ARNr aumenta linealmente con el incremento del volumen de entrada de la muestra. El kit de Norgen mostró la recuperación más consistente y alta del gen 5S rRNA de mantenimiento en comparación con los otros métodos de aislamiento.

Figura 2. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Micro de Norgen utilizado para purificar ADN circulante de 50 µL, 100 µL y 200 µL de plasma preparado a partir de sangre extraída con citrato como anticoagulante. A continuación, se utilizaron dos microlitros del ADN purificado como molde en las reacciones de qPCR para evaluar la linealidad del gen 5S ARNr de mantenimiento purificado a partir de los diferentes volúmenes de plasma. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Micro de Norgen fue capaz de recuperar el 96 % del gen 5S ARNr de 100 µL de plasma en relación a la cantidad que está presente en 50 µL de plasma. Además, se recuperó el 97 % del gen 5S rRNA de 200 µL de plasma en relación con la cantidad presente en 100 µL de plasma.

Figura 3. El ADN se aisló a partir de 50 µl, 100 µl y 200 µl de plasma utilizando el Micro Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Micro de Norgen. Se utilizaron volúmenes crecientes de la elución (2, 4 y 8 L) en una reacción qPCR de 20 L para observar cualquier disminución del valor Ct. Un aumento de los valores Ct con el aumento de la cantidad de molde sería una clara indicación de la presencia de inhibidores de la PCR en la muestra. Un aumento del volumen de elución utilizado como molde en la qPCR no afectó al valor Ct generado a partir de la qPCR y, de hecho, los valores Ct tienden a disminuir con el aumento del volumen de entrada de la PCR, lo que indica que el ADN purificado a partir del plasma utilizando el kit de Norgen está libre de los inhibidores comunes que suelen estar presentes en el plasma.

Figura 4. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Mini de Norgen se utilizó para purificar ADN circulante de 200 µl, 300 µl y 400 µl de plasma preparado a partir de sangre extraída con citrato como anticoagulante en comparación con los kits de la competencia Q. A continuación, se utilizaron dos microlitros del ADN purificado como molde en las reacciones qPCR para evaluar la cantidad relativa del gen 5S ARNr purificado. La cantidad relativa del gen 5S ARNr aumenta linealmente con el incremento del volumen de entrada de la muestra. El kit de Norgen mostró la recuperación más consistente y alta del gen 5S ARNr de mantenimiento de la casa en comparación con los otros métodos de aislamiento.

Figura 5. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Mini de Norgen se utilizó para purificar el ADN circulante de 200 µl, 300 µl y 400 µl de plasma preparado a partir de sangre extraída con citrato como anticoagulante. A continuación, se utilizaron dos microlitros del ADN purificado como molde en las reacciones de qPCR para evaluar la linealidad del gen 5S ARNr de mantenimiento purificado a partir de los diferentes volúmenes de plasma. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Mini de Norgen fue capaz de recuperar el 98% del gen 5S rRNA de 300 µL de plasma en relación a la cantidad que está presente en 200 µL de plasma. Además, se recuperó el 98 % del gen 5S ARNr de 400 µL de plasma en relación con la cantidad presente en 300 µL de plasma.

Figura 6. El ADN se aisló a partir de 200 µl, 300 µl y 400 µl de plasma utilizando el Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Mini de Norgen. Se utilizaron volúmenes crecientes de la elución (2, 4 y 8 L) en una reacción qPCR de 20 L para observar cualquier disminución del valor Ct. Un aumento de los valores Ct con el aumento de la cantidad de molde sería una clara indicación de la presencia de inhibidores de la PCR en la muestra. Un aumento del volumen de elución utilizado como molde en la qPCR no afectó al valor Ct generado a partir de la qPCR y, de hecho, los valores Ct tienden a disminuir con el aumento del volumen de entrada de la PCR, lo que indica que el ADN purificado a partir del plasma utilizando el kit de Norgen está libre de los inhibidores comunes que suelen estar presentes en el plasma.

Figura 7. Purificación de ADN circulante libre de células a partir de diferentes volúmenes de plasma. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Midi de Norgen se utilizó para purificar ADN circulante de 0,5 mL, 1 mL, 2 mL y 4 mL de plasma preparado a partir de sangre extraída con citrato como anticoagulante en comparación con los kits de la competencia Q. A continuación, se utilizaron dos microlitros del ADN purificado como molde en las reacciones qPCR para evaluar la cantidad relativa del gen 5S ARNr purificado. La cantidad relativa del gen 5S ARNr aumenta linealmente con el incremento del volumen de entrada de la muestra. El Kit de Norgen mostró la recuperación más consistente y alta del gen 5S ARNr de mantenimiento en comparación con los otros métodos de aislamiento.

Figura 8. Linealidad del ADN purificado a partir de volúmenes crecientes de plasma utilizando el Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Midi de Norgen. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Midi de Norgen se utilizó para purificar ADN circulante de 0,5 mL, 1 mL, 2 mL y 4 mL de plasma preparado a partir de sangre extraída con citrato como anticoagulante. A continuación, se utilizaron dos microlitros del ADN purificado como molde en las reacciones de qPCR para evaluar la linealidad del gen 5S ARNr de mantenimiento purificado a partir de los diferentes volúmenes de plasma. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Midi de Norgen fue capaz de recuperar el 97 % del gen 5S ARNr de 1 mL de plasma en relación con la cantidad que está presente en 0,5 mL de plasma. Además, se recuperó el 95 % del gen 5S ARNr de 2 mL de plasma en relación con la cantidad presente en 1 mL de plasma. Además, se recuperó el 95 % del gen 5S ARNr de 4 mL de plasma en relación con la cantidad presente en 2 mL de plasma.

Figura 9. Determinación de la cantidad de inhibición presente en muestras de ADN circulante libre de células plasmáticas al detectar el gen 5S humano. El ADN se aisló de 0,5 mL, 1 mL, 2 mL y 4 mL de plasma utilizando el Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Midi de Norgen Plasma/Suero. Se utilizaron volúmenes crecientes de la elución (2, 4 y 8 µl) en una reacción de qPCR de 20 µl para observar cualquier disminución del valor Ct. Un aumento de los valores Ct con el aumento de la cantidad de molde sería una clara indicación de la presencia de inhibidores de la PCR en la muestra. Un aumento del volumen de elución utilizado como molde en la qPCR no afectó al valor Ct generado a partir de la qPCR y, de hecho, los valores Ct tienden a disminuir con el aumento del volumen de entrada de la PCR, lo que indica que el ADN purificado a partir del plasma utilizando el kit de Norgen está libre de los inhibidores comunes que suelen estar presentes en el plasma.

Figura 10. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Maxi de Norgen se utilizó para purificar ADN circulante de 5 mL, 8 mL y 10 mL de plasma preparado a partir de sangre extraída con citrato como anticoagulante en comparación con los kits de la competencia Q. A continuación, se utilizaron dos mililitros del ADN purificado como molde en reacciones qPCR para evaluar la cantidad relativa del gen 5S rRNA purificado. La cantidad relativa del gen 5S ARNr aumenta linealmente con el incremento del volumen de entrada de la muestra. El kit de Norgen mostró la recuperación más consistente y alta del gen 5S rRNA de mantenimiento en comparación con los otros métodos de aislamiento.

Figura 11. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Maxi de Norgen se utilizó para purificar ADN circulante de 5 mL, 8 mL y 10 mL de plasma preparado a partir de sangre extraída con citrato como anticoagulante. A continuación, se utilizaron dos mililitros del ADN purificado como molde en las reacciones qPCR para evaluar la linealidad del gen 5S ARNr de mantenimiento purificado a partir de los diferentes volúmenes de plasma. El Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Maxi de Norgen fue capaz de recuperar el 94 % del gen 5S ARNr de 8 mL de plasma en relación a la cantidad que está presente en 5 mL de plasma. Además, se recuperó el 96 % del gen 5S ARNr de 10 mL de plasma en relación con la cantidad que está presente en 10 mL de plasma.

Figura 12. El ADN se aisló de 5 mL, 8 mL y 10 mL de plasma utilizando el Kit de Purificación de ADN Circulante Libre de Células en Plasma/Suero Maxi de Norgen. Se utilizaron volúmenes crecientes de la elución (2, 4 y 8 µl) en una reacción de qPCR de 20 µl para observar cualquier disminución del valor Ct. Un aumento de los valores Ct con el aumento de la cantidad de molde sería una clara indicación de la presencia de inhibidores de la PCR en la muestra. Un aumento del volumen de elución utilizado como molde en la qPCR no afectó al valor Ct generado a partir de la qPCR y, de hecho, los valores Ct tienden a disminuir con el aumento del volumen de entrada de la PCR, lo que indica que el ADN purificado a partir del plasma utilizando el kit de Norgen está libre de los inhibidores comunes que suelen estar presentes en el plasma.

Especificaciones del kit
Entrada mínima de plasma/suero	10 μL
Entrada máxima de plasma/suero	200 μL
Tamaño del ADN purificado	≥ 50 bp
Volumen de elución	25-50 μL
Tiempo para completar 10 purificaciones	15-20 minutos
Rendimiento medio*	Variable en función de la muestra

*Por favor, consulte la página 7 del manual del producto para conocer los rendimientos medios en plasma/suero y los métodos comunes de cuantificación del ADN.

Condiciones de almacenamiento y estabilidad del producto
Todas las soluciones deben mantenerse herméticamente cerradas y conservarse a temperatura ambiente. Este kit es estable durante 2 años a partir de la fecha de envío. El kit contiene una Proteinasa K lista para usar, que se disuelve en un tampón de almacenamiento especialmente preparado. La Proteinasa K tamponada es estable hasta 2 años después de la fecha de envío si se almacena a temperatura ambiente.

Documentation

Alternate formats available upon request by emailing info@norgenbiotek.com. Such requests shall be made:

in a timely manner that considers the person's accessibility needs due to disability; and
at a cost that is no more than the regular cost charged to other persons

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