Kits de aislamiento de ADN en heces

Figura 2. Calidad y concentración del ADN fecal medido con NanoDrop. Se obtuvo una alta concentración y calidad del ADN utilizando el kit de aislamiento de ADN fecal de Norgen a partir de muestras de heces frescas o conservadas. Figura 2A: Muestras de heces frescas, Figura 2B: Heces conservadas utilizando los tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen (Cat. 45660).

Figura 3. Detección de ARNr 16S a partir de ADN fecal aislado de 200 mg de muestras de heces frescas utilizando el kit de aislamiento de ADN fecal de Norgen y el kit competidor Qs. La calidad del ADN se confirmó mediante PCR en tiempo real utilizando 2 µl de ADN fecal (el volumen total de la reacción de PCR fue de 20 µl) para detectar el ARNr 16S de diferentes microorganismos en las muestras fecales. El valor Ct más temprano con las muestras de ADN de Norgen (líneas azules) en comparación con las muestras Qs de la competencia (líneas rojas) indicó una mayor calidad del ADN fecal para las aplicaciones posteriores. Figura 3A: Muestra de heces frescas, Figura 3B: Heces conservadas utilizando los tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen (Cat. 45660).

Figura 4. Detección del ARNr 5S a partir del ADN fecal aislado de 200 mg de muestras de heces frescas utilizando el Kit de Aislamiento de ADN Fecal de Norgen y el Kit Qs del Competidor. La calidad del ADN se confirmó mediante PCR en tiempo real utilizando 2 µl de ADN fecal (el volumen total de la reacción PCR fue de 20 µl) para detectar el ARNr 5S del ADN eucariota en las muestras fecales. El valor Ct más temprano con las muestras de ADN de Norgen (líneas azules) en comparación con las muestras Qs de la competencia (líneas rojas) indicó una mayor calidad del ADN fecal para las aplicaciones posteriores. Figura 4A: Muestra de heces frescas, Figura 4B: Heces conservadas utilizando los tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen (Cat. 45660).

Figura 5. Mejor detección del ARNr 16S a partir del ADN aislado con el Kit de Conservación del ADN de las Heces de Norgen y Aislamiento del ADN de las Heces. Se utilizaron dos microlitros de ADN fecal en un volumen de reacción PCR de 20 µl. Las heces conservadas con Kit de Conservación del ADN de las Heces de Norgen y Aislamiento del ADN de las Heces de Norgen mostraron una mejor detección del gen 16S ARNr en comparación con las heces frescas aisladas con el Competidor Q.

Figura 6. Distribución de 10 microbiomas fecales diferentes. A) Análisis de coordenadas principales de 10 microbiomas fecales que muestra diferencias en la distribución de las clasificaciones taxonómicas entre las muestras hasta el nivel de clase. B) Agrupación jerárquica de 10 microbiomas fecales basada en clasificaciones a nivel de género, incluyendo un gráfico de barras que muestra la abundancia relativa de clasificaciones a nivel de género para cada muestra en el dendrograma.

Figura 7. Aislamiento de ADN de alta calidad a partir de muestras de heces conservadas. El ADN se aisló a partir de 200 µl de muestras de heces conservadas utilizando el kit de aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen. Para la evaluación, se pasaron 10 µl de 75 µl de elución en un gel de agarosa 1X TAE al 1,2 %. Las muestras de heces se conservaron en tubos de recogida y transporte de ácidos nucleicos en heces de Norgen (Cat. 45630, 45660). M = Escala de ADN HighRanger de Norgen (Cat. 11900).

Figura 8. Comparación de las relaciones A260/280 y A260/230. El ADN se aisló a partir de 200 mg de muestras de heces utilizando el kit de aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen y el kit de aislamiento de ADN de heces (formato columna) de Norgen. A continuación, se comparó el ADN purificado para las relaciones A260/280 y A260/230. El ADN aislado con el Kit de Aislamiento de ADN en heces de Norgen (sistema de microesferas magnéticas) (A, B y C) mostró una calidad de ADN comparable a la del ADN aislado con el Kit de Aislamiento de ADN en heces de Norgen (método en columna), lo que indica que el Kit de Aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) generó el ADN más consistente y de mayor calidad.

Figura 9. ADN de alta calidad confirmado por PCR en tiempo real. El ADN se aisló a partir de 200 mg de heces utilizando el Kit de Aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen y el kit de aislamiento de ADN de heces (formato columna) de Norgen. La calidad del ADN purificado se evaluó utilizando 8 L de ADN fecal (el volumen total de la reacción PCR fue de 20 µL) para detectar el ARNr 16S de las diferentes muestras fecales. No se observó inhibición de la PCR en el ADN aislado con el Kit de Aislamiento de ADN en heces de Norgen (sistema de microesferas magnéticas) (círculos azules), similar al ADN aislado con el Kit de Aislamiento de ADN en heces de Norgen (método de columna) (círculos rojos), lo que indica la excelente consistencia del aislamiento y la calidad del ADN en heces para las aplicaciones posteriores.

Figura 10. Datos de Metagenómica 16S generados por Illumina MiSeq. El ADN de las heces se aisló utilizando el Kit de Aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen a partir de 200 mg de heces de donantes sanos, y los microbiomas de las heces se secuenciaron con éxito mediante Illumina MiSeq.

Figura 11. Aislamiento de ADN de alta calidad a partir de muestras de heces conservadas. El ADN se aisló a partir de 200 µl de muestras de heces conservadas utilizando el Kit de 96 Pocillos de Aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen. Para la evaluación, se pasaron 10 µl de 75 µl de elución en un gel de agarosa 1X TAE al 1,2 %. M = Escala de ADN HighRanger de Norgen (Cat. 11900).

Figura 12. ADN de alta calidad confirmado por PCR en tiempo real. El ADN se aisló a partir de 200 mg de heces utilizando el kit de 96 pocillos de aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen. La calidad del ADN purificado se evaluó utilizando 2 µl de ADN fecal (el volumen total de la reacción PCR fue de 20 µl) para detectar el ARNr 16S de la muestra fecal. No se observó ninguna inhibición de la PCR en el ADN aislado con el kit de 96 pocillos de Norgen para el aislamiento de ADN fecal (sistema de microesferas magnéticas), lo que indica la excelente consistencia del aislamiento y la alta calidad del ADN fecal para las aplicaciones posteriores.