Kits de aislamiento de ADN en heces

Descripción general del producto

Estos kits proporcionan un método cómodo y rápido para aislar ADN total a partir de muestras de heces frescas, congeladas y conservadas, incluidas las conservadas con los tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen (Cat. 45660). El protocolo universal permite aislar cómodamente y de forma simultánea el ADN genómico total de todos los microorganismos y células huésped presentes en la muestra de heces. Purifica el ADN con altos rendimientos y pesos moleculares de hasta 50 kb o más. El ADN purificado puede utilizarse en una serie de aplicaciones posteriores.

Kit de aislamiento de ADN de heces (columna de centrifugación)

Método universal para detectar simultáneamente ADN de microorganismos y de células huésped en muestras de heces. Elimina los inhibidores de la PCR, incluidos todos los restos de ácido húmico, mediante una combinación de homogeneización y lisis química y física. A continuación, se utiliza un procedimiento sencillo y rápido de columna centrífuga para purificar el ADN. El ADN purificado es de la máxima calidad y totalmente compatible con todas las aplicaciones posteriores, como PCR, qPCR, NGS y microarrays, ya que todas las sustancias de ácido húmico y otros inhibidores de la PCR se eliminan durante el proceso de aislamiento.

Kit de 96 pocillos para aislamiento de ADN de heces (alto rendimiento)

Procesamiento rápido y sencillo de alto rendimiento mediante centrifugación. Elimina los inhibidores de la PCR, incluidos todos los restos de ácido húmico, mediante una combinación de homogeneización y lisis química y física. A continuación, se utiliza un procedimiento sencillo y rápido de columna centrífuga para purificar el ADN. El ADN purificado es de la máxima calidad y totalmente compatible con todas las aplicaciones posteriores, como PCR, qPCR, NGS y microarrays, ya que todas las sustancias de ácido húmico y otros inhibidores de la PCR se eliminan durante el proceso de aislamiento.

Kit de aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas)

Procesado rápido y sencillo mediante un sistema de perlas magnéticas. Sistema de lisis robusto (lisis química combinada con una homogeneización mecánica).

Kit de 96 pocillos para aislamiento de ADN de heces (sistema de microesferas magnéticas de alto rendimiento)

Este kit proporciona un procesamiento rápido y sencillo mediante un sistema de microesferas magnéticas, y un sistema de lisis robusto (lisis química combinada con una homogeneización mecánica). Alto rendimiento y compatible con un sistema robotizado de automatización.

Detalles

Supporting Data

Figure 1 / 13

Figure 1. Higher Yields of DNA than Competitor Q.

Stool DNA was isolated from 200 mg of fresh or preserved stool samples using Norgen’s Stool DNA Isolation Kit and Competitor Q's Kit. For evaluation, 10 µL of DNA from the elution was run on 1X TAE 1.2% agarose gel. Norgen's kit isolated much higher yields of DNA. *Stool was collected using Norgen’s Stool Nucleic Acid Collection and Preservation tubes (Cat. 45660). Marker = Norgen’s HighRanger DNA Ladder (Cat. 11900).

Figure 2. Stool DNA quality and concentration measured by NanoDrop.

High DNA concentration and quality was obtained using Norgen’s Stool DNA Isolation Kit from fresh or preserved stool samples. Figure 2A: Fresh stool samples, Figure 2B: Preserved stool using Norgen’s Stool Nucleic Acid Collection and Preservation Tubes (Cat. 45660).

Figure 3. Detection of 16S rRNA from stool DNA isolated from 200 mg of fresh stool samples using Norgen's Stool DNA Isolation Kit and Competitor Q’s kit.

DNA quality was confirmed by Real-time PCR using 2 µL of stool DNA (total PCR reaction volume was 20 µL) to detect 16S rRNA from different microorganisms in the stool samples. The earlier Ct value with Norgen's DNA samples (blue lines) compared to Competitor Q’s samples (red lines) indicated a higher quality of stool DNA for downstream applications. Figure 3A: Fresh stool sample, Figure 3B: Preserved stool using Norgen’s Stool Nucleic Acid Collection and Preservation Tubes (Cat. 45660).

Figure 4. Detection of 5S rRNA from the Stool DNA isolated from 200 mg of fresh stool samples using Norgen's Stool DNA Isolation Kit and Competitor Q’s Kit.

DNA quality was confirmed by Real-time PCR using 2 µL of stool DNA (total PCR reaction volume was 20 µL) to detect 5S rRNA from eukaryotic DNA in the stool samples. The earlier Ct value with Norgen's DNA samples (blue lines) compared to Competitor Q’s samples (red lines) indicated a higher quality of stool DNA for downstream applications. Figure A: Fresh stool sample, Figure B: Preserved stool using Norgen’s Stool Nucleic Acid Collection and Preservation Tubes (Cat. 45660).

Figure 5. Better 16S rRNA detection from DNA isolated using Norgen’s Stool DNA Preservative and Stool DNA Isolation Kit.

Two microlitres of stool DNA was used in a 20 µL PCR reaction volume. Stool was preserved using Norgen’s Stool DNA Preservative and isolated using Norgen’s Stool DNA Isolation Kit showed better 16S rRNA gene detection as compared to fresh stool isolated with Competitor Q.

Figure 6. Distribution of 10 Different Fecal Microbiomes.

A) Principal Coordinate Analysis of 10 fecal microbiomes showing differences in the distribution of taxonomic classifications between samples up to class level. B) Hierarchical clustering of 10 fecal microbiomes based on genus-level classifications, including a bar chart showing the relative abundance of genus-level classifications for each sample in the dendrogram.

Figure 7. High Quality DNA Isolated from Preserved Stool Samples.

DNA was isolated from 200 µL preserved stool samples using Norgen’s Stool DNA Isolation Kit (Magnetic Bead System).For evaluation, 10 µL from 75 µL of elution were run on 1X TAE 1.2% agarose gel. Stool samples were preserved in Norgen’s Stool Nucleic Acid Collection and Transport Tubes (Cat. 45630, 45660). M = Norgen’s HighRanger DNA Ladder (Cat. 11900).

Figure 8. Comparison of A260/280 and A260/230 ratios.

DNA was isolated from 200 mg stool samples using Norgen's Stool DNA Isolation Kit (Magnetic Bead System) and Norgen's Stool DNA Isolation Kit (column format). The purified DNA was then compared for A260/280 and A260/230 ratios. DNA isolated using Norgen’s Stool DNA Isolation Kit (Magnetic Bead System) (A, B and C) showed a comparable DNA quality to the DNA isolated using Norgen’s Stool DNA Isolation (Column method), indicating the consistence and highest DNA quality were generated by the Stool DNA Isolation Kit (Magnetic Bead System).

Figure 9. High Quality DNA confirmed by Real-time PCR.

DNA was isolated from 200 mg stool using Norgen's Stool DNA Isolation Kit (Magnetic Bead System) and Norgen's Stool DNA Isolation Kit (column format). The quality of the purified DNA was evaluated by using 8 μL of stool DNA (total PCR reaction volume was 20 µL) to detect 16S rRNA from the different stool samples. No PCR inhibition was observed from DNA isolated using Norgen's Stool DNA Isolation Kit (Magnetic Bead System) (blue circles), similar to the DNA isolated using Norgen’s Stool DNA Isolation Kit (Column method) (red circles), indicating the excellent isolation consistency and the quality of the stool DNA for downstream applications.

Figure 10. 16S Metagenomics data generated by Illumina MiSeq.

Stool DNA was isolated using Norgen’s Stool DNA Isolation Kit (Magnetic Bead System) from 200 mg of stool from healthy donors, and the stool microbiomes were successfully sequenced by Illumina MiSeq.

Figure 13. Comparison of DNA yield and integrity using two automated platforms with the Stool DNA Isolation 96-Well Kit (High Throughput Magnetic Bead System, Cat. 63100).

DNA was extracted from 200 µL preserved stool samples using the same extraction kit on two automated platforms: Isopure 96 and KingFisher. Total DNA yield was assessed by 16S rRNA gene qPCR (left panel), showing comparable performance across platforms and replicates. Error bars represent standard deviations. High-molecular-weight DNA was consistently recovered from both platforms, demonstrating effective and reproducible DNA isolation regardless of automation system used.

Datos de respaldo

Figura 1. Mayores rendimientos de ADN que el competidor Q. El ADN fecal se aisló a partir de 200 mg de muestras de heces frescas o conservadas utilizando el kit de aislamiento de ADN fecal de Norgen y el kit del competidor Q. Para la evaluación, se pasaron 10 µl de ADN de la elución en un gel de agarosa 1X TAE al 1,2 %. El kit de Norgen aisló rendimientos mucho mayores de ADN. *Las heces se recogieron utilizando tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen (Cat. 45660). Marcador = Escalera de ADN HighRanger de Norgen (Cat. 11900).

Figura 2. Calidad y concentración del ADN fecal medido con NanoDrop. Se obtuvo una alta concentración y calidad del ADN utilizando el kit de aislamiento de ADN fecal de Norgen a partir de muestras de heces frescas o conservadas. Figura 2A: Muestras de heces frescas, Figura 2B: Heces conservadas utilizando los tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen (Cat. 45660).

Figura 3. Detección de ARNr 16S a partir de ADN fecal aislado de 200 mg de muestras de heces frescas utilizando el kit de aislamiento de ADN fecal de Norgen y el kit competidor Qs. La calidad del ADN se confirmó mediante PCR en tiempo real utilizando 2 µl de ADN fecal (el volumen total de la reacción de PCR fue de 20 µl) para detectar el ARNr 16S de diferentes microorganismos en las muestras fecales. El valor Ct más temprano con las muestras de ADN de Norgen (líneas azules) en comparación con las muestras Qs de la competencia (líneas rojas) indicó una mayor calidad del ADN fecal para las aplicaciones posteriores. Figura 3A: Muestra de heces frescas, Figura 3B: Heces conservadas utilizando los tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen (Cat. 45660).

Figura 4. Detección del ARNr 5S a partir del ADN fecal aislado de 200 mg de muestras de heces frescas utilizando el Kit de Aislamiento de ADN Fecal de Norgen y el Kit Qs del Competidor. La calidad del ADN se confirmó mediante PCR en tiempo real utilizando 2 µl de ADN fecal (el volumen total de la reacción PCR fue de 20 µl) para detectar el ARNr 5S del ADN eucariota en las muestras fecales. El valor Ct más temprano con las muestras de ADN de Norgen (líneas azules) en comparación con las muestras Qs de la competencia (líneas rojas) indicó una mayor calidad del ADN fecal para las aplicaciones posteriores. Figura 4A: Muestra de heces frescas, Figura 4B: Heces conservadas utilizando los tubos de recogida y conservación de ácido nucleico en heces de Norgen (Cat. 45660).

Figura 5. Mejor detección del ARNr 16S a partir del ADN aislado con el Kit de Conservación del ADN de las Heces de Norgen y Aislamiento del ADN de las Heces. Se utilizaron dos microlitros de ADN fecal en un volumen de reacción PCR de 20 µl. Las heces conservadas con Kit de Conservación del ADN de las Heces de Norgen y Aislamiento del ADN de las Heces de Norgen mostraron una mejor detección del gen 16S ARNr en comparación con las heces frescas aisladas con el Competidor Q.

Figura 6. Distribución de 10 microbiomas fecales diferentes. A) Análisis de coordenadas principales de 10 microbiomas fecales que muestra diferencias en la distribución de las clasificaciones taxonómicas entre las muestras hasta el nivel de clase. B) Agrupación jerárquica de 10 microbiomas fecales basada en clasificaciones a nivel de género, incluyendo un gráfico de barras que muestra la abundancia relativa de clasificaciones a nivel de género para cada muestra en el dendrograma.

Figura 7. Aislamiento de ADN de alta calidad a partir de muestras de heces conservadas. El ADN se aisló a partir de 200 µl de muestras de heces conservadas utilizando el kit de aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen. Para la evaluación, se pasaron 10 µl de 75 µl de elución en un gel de agarosa 1X TAE al 1,2 %. Las muestras de heces se conservaron en tubos de recogida y transporte de ácidos nucleicos en heces de Norgen (Cat. 45630, 45660). M = Escala de ADN HighRanger de Norgen (Cat. 11900).

Figura 8. Comparación de las relaciones A260/280 y A260/230. El ADN se aisló a partir de 200 mg de muestras de heces utilizando el kit de aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen y el kit de aislamiento de ADN de heces (formato columna) de Norgen. A continuación, se comparó el ADN purificado para las relaciones A260/280 y A260/230. El ADN aislado con el Kit de Aislamiento de ADN en heces de Norgen (sistema de microesferas magnéticas) (A, B y C) mostró una calidad de ADN comparable a la del ADN aislado con el Kit de Aislamiento de ADN en heces de Norgen (método en columna), lo que indica que el Kit de Aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) generó el ADN más consistente y de mayor calidad.

Figura 9. ADN de alta calidad confirmado por PCR en tiempo real. El ADN se aisló a partir de 200 mg de heces utilizando el Kit de Aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen y el kit de aislamiento de ADN de heces (formato columna) de Norgen. La calidad del ADN purificado se evaluó utilizando 8 L de ADN fecal (el volumen total de la reacción PCR fue de 20 µL) para detectar el ARNr 16S de las diferentes muestras fecales. No se observó inhibición de la PCR en el ADN aislado con el Kit de Aislamiento de ADN en heces de Norgen (sistema de microesferas magnéticas) (círculos azules), similar al ADN aislado con el Kit de Aislamiento de ADN en heces de Norgen (método de columna) (círculos rojos), lo que indica la excelente consistencia del aislamiento y la calidad del ADN en heces para las aplicaciones posteriores.

Figura 10. Datos de Metagenómica 16S generados por Illumina MiSeq. El ADN de las heces se aisló utilizando el Kit de Aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen a partir de 200 mg de heces de donantes sanos, y los microbiomas de las heces se secuenciaron con éxito mediante Illumina MiSeq.

Figura 11. Aislamiento de ADN de alta calidad a partir de muestras de heces conservadas. El ADN se aisló a partir de 200 µl de muestras de heces conservadas utilizando el Kit de 96 Pocillos de Aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen. Para la evaluación, se pasaron 10 µl de 75 µl de elución en un gel de agarosa 1X TAE al 1,2 %. M = Escala de ADN HighRanger de Norgen (Cat. 11900).

Figura 12. ADN de alta calidad confirmado por PCR en tiempo real. El ADN se aisló a partir de 200 mg de heces utilizando el kit de 96 pocillos de aislamiento de ADN en heces (sistema de microesferas magnéticas) de Norgen. La calidad del ADN purificado se evaluó utilizando 2 µl de ADN fecal (el volumen total de la reacción PCR fue de 20 µl) para detectar el ARNr 16S de la muestra fecal. No se observó ninguna inhibición de la PCR en el ADN aislado con el kit de 96 pocillos de Norgen para el aislamiento de ADN fecal (sistema de microesferas magnéticas), lo que indica la excelente consistencia del aislamiento y la alta calidad del ADN fecal para las aplicaciones posteriores.

Especificaciones del kit
Aporte máximo de heces:	200 mg (heces frescas/congeladas) or 400 μL (heces conservadas)
Tipo de heces procesadas	Heces congeladas, frescas o en conserva
Formato	Columna giratoria
Capacidad máxima de unión de la columna	50 μg
Volumen máximo de carga de la columna	650 μL
Volumen de elución	50 μL
Tiempo para completar 10 purificaciones	30 minutos
Aplicaciones	PCR, qPCR, análisis Southern Blot, secuenciación, análisis de micromatrices.

Condiciones de almacenamiento y estabilidad del producto
Todas las soluciones deben mantenerse herméticamente cerradas y conservarse a temperatura ambiente. Este kit es estable durante 2 años a partir de la fecha de envío.

Documentation

Alternate formats available upon request by emailing info@norgenbiotek.com. Such requests shall be made:

in a timely manner that considers the person's accessibility needs due to disability; and
at a cost that is no more than the regular cost charged to other persons