Kit de aislamiento de ADN fágico
Para la purificación rápida del ADN total de bacteriófagos.
Kit de aislamiento de ADN fágico
Para la purificación rápida del ADN total de bacteriófagos.
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Descripción general del producto
Este kit proporciona un método rápido de columna de centrifugación para la purificación del ADN total de un amplio espectro de bacteriófagos propagados en bacterias crecidas en cultivos líquidos. El ADN se aísla sin utilizar fenol, cloroformo ni procedimientos de bandeo con cloruro de cesio. El procedimiento basado en la columna de centrifugación es rápido y puede completarse en menos de 45 minutos. El kit es muy eficaz para procesar pequeños volúmenes de sobrenadante de fago (500 µl - 1 ml) y con los tratamientos opcionales de DNasa y Proteinasa K se maximiza el rendimiento del ADN de fago y se minimiza la contaminación del ADN huésped. El ADN fágico total purificado tiene la máxima integridad y puede utilizarse en una serie de aplicaciones posteriores, como PCR, qPCR, polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP), secuenciación, clonación, Southern Blot, etc.
Detalles
Datos de respaldo
Figura 1. Eliminación eficaz del ADN genómico del huésped sin reducir el rendimiento del ADN del fago. Se aisló el ADN total de cuatro cultivos de fagos enriquecidos utilizando el kit de aislamiento de ADN de fagos de Norgen. Se realizó un pretratamiento con DNasa I antes de añadir el tampón de lisis suministrado. Brevemente, se añadieron 20 unidades de DNasa I a 1 mL de cultivo de fago enriquecido y se incubó la mezcla a temperatura ambiente durante 20 minutos. Tras el tratamiento con ADNasa I se siguió el procedimiento. Como control, se aisló ADN de alícuotas de los mismos 4 cultivos utilizando el kit de aislamiento de ADN de fagos de Norgen sin realizar el tratamiento con DNasa I. Para el análisis del ADN, se cargaron 10 µl de cada elución de 50 µl en un gel de agarosa TAE 1X. Como puede observarse, el ADN del fago estaba protegido con seguridad del tratamiento con DNasa I por su proteína de cubierta, mientras que el ADN genómico del hospedador era degradado eficazmente por la DNasa I. Así pues, el pretratamiento con DNasa I dio lugar a una menor contaminación del ADNg del hospedador en la elución final del fago sin influir en el rendimiento total de ADN del fago. El carril M es La Escalera de ADN Highranger de 1 kb de Norgen (Cat. 11900)
Figura 2. El tratamiento opcional con proteinasa K mejora el rendimiento del ADN para determinadas cepas de fagos. El ADN total se aisló con y sin el tratamiento opcional con Proteinasa K utilizando el Kit de Aislamiento de ADN Fágico de Norgen. Brevemente, se añadieron 4 µl de proteinasa K (20 mg/mL) a 1 mL de cultivo de fagos enriquecido y se incubaron a 55 °C durante 15 minutos con el tampón de lisis de fagos. Tras el tratamiento con proteinasa K se siguió el procedimiento. Como control, se aisló ADN de alícuotas de los mismos 8 cultivos utilizando el kit de aislamiento de ADN de fagos de Norgen sin realizar el tratamiento con proteinasa K. Para el análisis del ADN, se cargaron 10 µl de cada elución de 50 µl en un gel de agarosa TAE 1X y se comparó el rendimiento de ADN de los ocho tipos de fagos diferentes (carril 1 a 8). Como puede observarse, el tratamiento opcional de Proteinasa K mejoró drásticamente el rendimiento de ADN fágico en los carriles 2, 5 y 6. El carril M es La Escalera de ADN Highranger de 1 kb de Norgen (Cat. 11900)
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Especificaciones del kit
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Capacidad de enlace de la columna
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50 µg
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Volumen máximo de carga de la columna
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650 µL
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Tamaño del ADN purificado
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Todos los tamaños
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| Cantidad máxima de material de partida |
1 x 1010 pfu/mL de fagos enriquecidos
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| Rendimiento medio* |
3-15 µg de ADN a partir de 106-1010 pfu/mL
de fagos enriquecidos |
| Tiempo para completar 10 purificaciones |
45 minutos
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* Los rendimientos medios varían en función de las condiciones utilizadas y de la fase de desarrollo.
Condiciones de almacenamiento y estabilidad del producto
Todas las soluciones deben mantenerse herméticamente cerradas y conservarse a temperatura ambiente. Este kit es estable durante 1 año a partir de la fecha de envío.