Kit de purificación de ARN Total Plus
Para la purificación de ARN total - incluyendo microARN - con eliminación rápida de ADNg
Kit de purificación de ARN Total Plus
Para la purificación de ARN total - incluyendo microARN - con eliminación rápida de ADNg
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Descripción general del producto
Este kit purifica el ARN total, incluido el miARN, a partir de muestras biológicas, y emplea una columna adicional para la eliminación eficaz del ADNg contaminante, sustituyendo así el paso enzimático de la DNasa.
Extraiga eficazmente el ARN total de una serie de muestras como células, bacterias, levaduras, virus y fluidos corporales como plasma/suero, sangre, saliva, LCR, etc. Extraiga ARN de alta calidad y pureza con excelentes valores de RIN y A260/A280 adecuados para aplicaciones posteriores como qRT-PCR, RT-PCR, microarrays, NGS y más.
El kit purifica todos los tamaños de ARN, desde grandes ARNm, ARNnc hasta microARN (miARN) en la misma fracción sin necesidad de fenol. Aísla todas las secuencias de ARN a la misma velocidad independientemente de su tamaño. Además, cuando las secuencias de ARN son pequeñas (por ejemplo, miARN), la columna se une a ARN pequeños independientemente de su contenido en GC.
Detalles
Datos de respaldo
Figura 1. Extracción de ADN genómico de células HeLa. El kit de purificación de ARN total Plus de Norgen es único en el sentido de que contiene una columna de eliminación de ADN genómico, lo que permite la eliminación de ADNg sin el uso de enzimas. Las células HeLa se hicieron pasar por la columna de eliminación de ADNg o no recibieron ningún tratamiento de eliminación de ADNg. La Columna de Eliminación de ADN Genómico eliminó con éxito el ADNg tanto de 1 millón de células HeLa (Panel A) como de 1x105 células HeLa (Panel B). En los paneles A y B, la imagen de la izquierda muestra el ARN corrido en un gel de agarosa EtBR al 1,2 %, para visualizar mejor cualquier contaminación de ADNg. La imagen de la derecha muestra un gel de formaldehído-agarosa al 1,0 % para permitir una mejor desnaturalización del ARN de la muestra. Para entradas más altas, como en la imagen A, la Columna de Eliminación de ADN Genómico también dio lugar a rendimientos de ARN más altos que las muestras no tratadas.
Figura 2. Valores Delta Ct observados entre diferentes técnicas de eliminación de ADNg. Es bien sabido que el ADN genómico contamina las muestras de ARN y, en consecuencia, los resultados de la RT-qPCR. Por lo tanto, para determinar la cantidad de contaminación por ADN genómico en las muestras de ARN, se puede utilizar una RT-qPCR para comparar los valores Ct observados con y sin transcripción inversa de la muestra de ARN. Es lo que se conoce como Delta Ct. Se pasaron un millón y 1x105 células HeLa a través de la columna de eliminación de ADNg o se sometieron a un tratamiento con DNasa utilizando DNasa I sin RNasa de Norgen (Cat# 25710). La columna de eliminación de ADNg eliminó el ADNg de forma similar a un tratamiento con DNasa. Para entradas más altas (es decir, 1 millón de células HeLa), la columna de eliminación de ADNg eliminó con éxito más contaminación de ADNg de las muestras de ARN que el tratamiento con DNasa. Cuando se redujeron los aportes, la cantidad de contaminación por ADN genómico en la muestra tratada con DNasa fue similar a la de la muestra pasada por la columna de eliminación de ADNg. Ambos métodos funcionan bien para eliminar la contaminación por ADNg en muestras de ARN.
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Especificaciones del kit
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Capacidad máxima de unión por columna:
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hasta 50 μg de ARN
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Volumen máximo de carga por columna de centrifugado
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650 μL
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Tamaño del ARN purificado
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Todos los tamaños, incluido < 200 nt
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| Tiempo para completar 10 purificaciones |
25 minutos
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Cantidad máxima de material de partida
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Tejido hepático
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20 mg
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Tejido cardiaco
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5 mg
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Tejido renal
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20 mg
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Tejido cerebral
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25 mg
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| Tejido pulmonar |
20 mg
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Tejido del bazo
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20 mg
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Sangre entera
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100 µL
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Células Hela
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3 x 106
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| CHO |
3 x 106
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| Levadura |
1 x 108 células
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| E.coli |
1 x 109 CFU/mL
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| Bacterias | 1 x 109 células | ||
| Plasma/Suero | 200 µL | ||
| Hongos |
50 mg
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| Tejido vegetal |
50 mg
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| Viruses |
≤100 µL de suspensión viral
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Rendimiento medio
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Todas las soluciones deben mantenerse herméticamente cerradas y conservarse a temperatura ambiente. Este kit es estable durante 1 año a partir de la fecha de envío.