Kit de purificación de ARN Total Plus

Para la purificación de ARN total - incluyendo microARN - con eliminación rápida de ADNg

Kit de purificación de ARN Total Plus

SKU

ES-48300

Para la purificación de ARN total - incluyendo microARN - con eliminación rápida de ADNg

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Variaciones

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Descripción general del producto

Este kit purifica el ARN total, incluido el miARN, a partir de muestras biológicas, y emplea una columna adicional para la eliminación eficaz del ADNg contaminante, sustituyendo así el paso enzimático de la DNasa.

Extraiga eficazmente el ARN total de una serie de muestras como células, bacterias, levaduras, virus y fluidos corporales como plasma/suero, sangre, saliva, LCR, etc. Extraiga ARN de alta calidad y pureza con excelentes valores de RIN y A260/A280 adecuados para aplicaciones posteriores como qRT-PCR, RT-PCR, microarrays, NGS y más.

El kit purifica todos los tamaños de ARN, desde grandes ARNm, ARNnc hasta microARN (miARN) en la misma fracción sin necesidad de fenol. Aísla todas las secuencias de ARN a la misma velocidad independientemente de su tamaño. Además, cuando las secuencias de ARN son pequeñas (por ejemplo, miARN), la columna se une a ARN pequeños independientemente de su contenido en GC.

Detalles

Supporting Data

Figure 1 / 2

Figure 1. Genomic DNA Removal from HeLa cells.

Norgen's Total RNA Purification Plus Kit is unique in that it contains a Genomic DNA Removal Column, allowing for gDNA removal without the use of enzymes. HeLa cells were either passed through the gDNA Removal Column, or received no gDNA removal treatment. The Genomic DNA Removal Column successfully removed gDNA from both 1 million HeLa cells (Panel A) and 1x10⁵ HeLa cells (Panel B). For both Panels A and B, the left image displays the RNA run on a 1.2% EtBR-agarose gel, to better visualize any gDNA contamination. The right image displays a 1.0% formaldehyde-agarose gel to allow for better denaturation of RNA in the sample. For higher inputs, as in image A, the Genomic DNA Removal Column also resulted in higher RNA yields than the non-treated samples.

Figure 2. Delta Ct Values Observed Between Different gDNA Removal Techniques.

Genomic DNA is well known to contaminate RNA samples, and subsequently RT-qPCR results. Therefore, to determine the amount of genomic DNA contamination in RNA samples, an RT-qPCR can be used to compare Ct values observed with and without reverse transcription of the RNA sample. This is known as the Delta Ct. One million and 1x10⁵ HeLa cells were either passed through the gDNA Removal Column or subjected to DNase-treatment using Norgen's RNase-Free DNase I (Cat# 25710). The gDNA Removal column eliminated gDNA similar to a DNase treatment. For higher inputs (i.e. 1 Million HeLa cells), the gDNA Removal Column successfully removed more gDNA contamination from the RNA samples than the DNase-treatment. When inputs were lowered, the amount of genomic DNA contamination in the DNase-treated sample was similar to the sample passed through the gDNA Removal Column. Both methods work well for removing gDNA contamination in RNA samples.

Datos de respaldo

Figura 1. Extracción de ADN genómico de células HeLa. El kit de purificación de ARN total Plus de Norgen es único en el sentido de que contiene una columna de eliminación de ADN genómico, lo que permite la eliminación de ADNg sin el uso de enzimas. Las células HeLa se hicieron pasar por la columna de eliminación de ADNg o no recibieron ningún tratamiento de eliminación de ADNg. La Columna de Eliminación de ADN Genómico eliminó con éxito el ADNg tanto de 1 millón de células HeLa (Panel A) como de 1x105 células HeLa (Panel B). En los paneles A y B, la imagen de la izquierda muestra el ARN corrido en un gel de agarosa EtBR al 1,2 %, para visualizar mejor cualquier contaminación de ADNg. La imagen de la derecha muestra un gel de formaldehído-agarosa al 1,0 % para permitir una mejor desnaturalización del ARN de la muestra. Para entradas más altas, como en la imagen A, la Columna de Eliminación de ADN Genómico también dio lugar a rendimientos de ARN más altos que las muestras no tratadas.

Figura 2. Valores Delta Ct observados entre diferentes técnicas de eliminación de ADNg. Es bien sabido que el ADN genómico contamina las muestras de ARN y, en consecuencia, los resultados de la RT-qPCR. Por lo tanto, para determinar la cantidad de contaminación por ADN genómico en las muestras de ARN, se puede utilizar una RT-qPCR para comparar los valores Ct observados con y sin transcripción inversa de la muestra de ARN. Es lo que se conoce como Delta Ct. Se pasaron un millón y 1x105 células HeLa a través de la columna de eliminación de ADNg o se sometieron a un tratamiento con DNasa utilizando DNasa I sin RNasa de Norgen (Cat# 25710). La columna de eliminación de ADNg eliminó el ADNg de forma similar a un tratamiento con DNasa. Para entradas más altas (es decir, 1 millón de células HeLa), la columna de eliminación de ADNg eliminó con éxito más contaminación de ADNg de las muestras de ARN que el tratamiento con DNasa. Cuando se redujeron los aportes, la cantidad de contaminación por ADN genómico en la muestra tratada con DNasa fue similar a la de la muestra pasada por la columna de eliminación de ADNg. Ambos métodos funcionan bien para eliminar la contaminación por ADNg en muestras de ARN.

Especificaciones del kit

Capacidad máxima de unión por columna:

hasta 50 μg de ARN

Volumen máximo de carga por columna de centrifugado

650 μL

Tamaño del ARN purificado

Todos los tamaños, incluido < 200 nt

Tiempo para completar 10 purificaciones

25 minutos

Cantidad máxima de material de partida

Tejido hepático

20 mg

Tejido cardiaco

5 mg

Tejido renal

20 mg

Tejido cerebral

25 mg

Tejido pulmonar

20 mg

Tejido del bazo

20 mg

Sangre entera

100 µL

Células Hela

3 x 10⁶

CHO

3 x 10⁶

Levadura

1 x 10⁸ células

E.coli

1 x 10⁹ CFU/mL

Bacterias

1 x 10⁹células

Plasma/Suero

200 µL

Hongos

50 mg

Tejido vegetal

50 mg

Viruses

≤100 µL de suspensión viral

Rendimiento medio

Células HeLa (1 x 10⁶ células) E. coli (1 x 10⁹ células)	15 µg 50 µg

Condiciones de almacenamiento y estabilidad del producto
Todas las soluciones deben mantenerse herméticamente cerradas y conservarse a temperatura ambiente. Este kit es estable durante 1 año a partir de la fecha de envío.

Alternate formats available upon request by emailing info@norgenbiotek.com. Such requests shall be made:

in a timely manner that considers the person's accessibility needs due to disability; and
at a cost that is no more than the regular cost charged to other persons