Kit de purificación de ARN Total plus micro
Purificación rápida de ARN total -incluido microARN - a partir de pequeñas cantidades de entrada
Kit de purificación de ARN Total plus micro
Purificación rápida de ARN total -incluido microARN - a partir de pequeñas cantidades de entrada
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Descripción general del producto
El kit de purificación de ARN total Plus Micro de Norgen proporciona un método rápido y sensible para el aislamiento y la purificación de ARN total a partir de pequeñas cantidades de células animales cultivadas, muestras de tejidos y muestras microdiseccionadas, incluida la microdisección por captura con láser (LCM). El kit purifica todos los tamaños de ARN, desde el ARNm grande y el ARN ribosómico hasta el microARN (miARN) y el ARN de interferencia pequeño (siARN). El ADN genómico se elimina de la muestra mediante una columna de eliminación de ADN genómico, y el ARN se purifica preferentemente de otros componentes celulares, como las proteínas, sin utilizar fenol ni cloroformo. El ARN purificado presenta la máxima integridad y puede utilizarse en una serie de aplicaciones posteriores, como PCR en tiempo real, PCR de transcripción inversa, Northern blot, protección contra RNasas y extensión de cebadores, así como en ensayos de arrays de expresión.
Tecnología de purificación de Norgen
La purificación se basa en la cromatografía en columna centrífuga utilizando la resina patentada de Norgen como matriz de separación. El ARN se purifica preferentemente de otros componentes celulares, como las proteínas, sin utilizar fenol ni cloroformo. El proceso consiste en lisar primero las células o el tejido de interés con el tampón RL suministrado (véase el diagrama de flujo en la página 4). A continuación, el ADN se captura en una columna de extracción de ADN genómico. A continuación, se añade etanol al flujo de la etapa de eliminación de ADN y la solución se carga en una microcolumna de purificación de ARN. La resina de Norgen fija el ARN de una manera que depende de las concentraciones iónicas. De este modo, sólo el ARN se unirá a la columna, mientras que las proteínas contaminantes se eliminarán en el flujo o quedarán retenidas en la parte superior de la resina. A continuación, el ARN unido se lava con la solución de lavado A suministrada para eliminar cualquier impureza restante, y el ARN total purificado se eluye con la solución de elución A. El diseño especial de la microcolumna de centrifugación permite un pequeño volumen de elución de tan solo 20 μL. El ARN purificado tiene la máxima integridad y puede utilizarse en diversas aplicaciones posteriores.
Detalles
Datos de respaldo
Figura 1. Gran sensibilidad al aislamiento. El kit de purificación de ARN total Plus Micro de Norgen permite la extracción sensible de ARN a partir de una sola célula. Se extrajo el ARN total de un número decreciente de células HeLa y se realizó una RT-qPCR para detectar el transcrito de S14 humano en el ARN aislado. El producto PCR de S14 se detectó a partir de una sola célula.
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Especificaciones del kit
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Capacidad máxima de unión a la columna
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35 μg
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Volumen máximo de carga de la columna
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650 μL
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| Volumen mínimo de elución | 20 μL |
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Tamaño del ARN purificado
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Todos los tamaños, incluido el ARN pequeño (< 200 nt) |
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Cantidad máxima de material de partida: |
5 x 105 células Hasta 7.5 mL |
| Tiempo para completar 10 purificaciones |
22 minutos
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| Rendimiento medio* Células HeLa (1 x 105 células) |
1.5 μg
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*para el tejido fibroso, se requiere un tratamiento adicional con Proteinasa K
Condiciones de almacenamiento y estabilidad del producto
Todas las soluciones deben mantenerse herméticamente cerradas y conservarse a temperatura ambiente. Este kit es estable durante 1 año a partir de la fecha de envío.