Sistema de recogida y conservación de hisopos fecales

Figura 2. Integridad del ADN y ARN total de heces aislados de muestras de heces conservadas. Se aislaron ADN y ARN de 200 µl de heces conservadas de 4 donantes diferentes (carriles A a D) ;almacenado a temperatura ambiente en los momentos indicados (ADN a los 27 meses y ARN a los 7 días) utilizando el kit de aislamiento de ácido nucleico en heces de Norgen (n.º de catálogo 45600). A continuación, se cargaron 10 µl de los 75 µl de ácido nucleico eluido en un gel para análisis visual. Se aisló ADN de heces de alta integridad a partir de muestras de heces conservadas que se almacenaron a temperatura ambiente durante 27 meses, y se aisló ARN de alta integridad de muestras de heces almacenadas durante 7 días a temperatura ambiente. Lane M es la escalera de ADN HighRanger de 1 kb de Norgen (Cat. 11900).

Figura 3. Monitoreo de la estabilidad del ADN del adenovirus (Ad5subE1) añadido a muestras de heces conservadas mediante el ensayo de PCR en tiempo real TaqMan. Las muestras de heces conservadas se enriquecieron con 6 x 10^{9 pfμ/mL de Adenovirus, y se retiraron muestras de 200 µL en los puntos de tiempo indicados. Luego se aisló el ADN de las heces utilizando el kit de aislamiento de ADN en heces de Norgen (Cat. 27600). A continuación, se utilizaron 2 µl de plantilla de ADN de cada 50 µl de elución en una reacción de PCR de 20 µl para detectar el ADN de adenovirus. Se demostró que el conservante de heces estabiliza el ADN del adenovirus hasta por 21 semanas a temperatura ambiente, lo que indica que el sistema de recolección y preservación de hisopos fecales de Norgen proporciona un sistema de transporte de muestras seguro y conveniente.}

Figura 4. Regroupement hiérarchique des échantillons de selles au niveau du phylum dans différentes conditiones de stockage. La composición microbienne des échantillons de selles conservés dans les tubes de prélèvement et de conservation de l'acide nucléique des selles de Norgen (Cat. 45630, 45660) ne diferente pas significativament de ceux des témoins (selles fraîches du jour 0 à la RT) durante un período de 2 días, tandis que les échantillons de selles non conservés ont montré a una distancia dans le dendrogramme par rapport au profil original des selles.

Figura 5. Diferencia entre los 5 principales microorganismos abondants au niveau de l'embranchement par rapport aux selles fraîches (día 0). L'abondance des Firmicuties, des Bacteroidetes et des protéobactéries de l'échantillon de selles Conservé était plus elevado que celle des selles fraîches non conservées (NP) después de 2 días de almacenamiento a temperatura ambiente, lo que indica que la originalidad del perfil de los microorganismos del échantillon se conserva más cerca de celle de l' échantillon de selles fraîches (día 0).

Figura 6. Abundancia relativa de géneros bacterianos entre los cantos de ventas conservados y no conservados a temperatura ambiente durante 2 días. Préserver l'échantillon de selles en utilisant les tubes de prélèvement et de conservation de l'acide nucléique de Norgen (Cat. 45630, 45660) ont montré une relativité proche de l'échantillon de selles fraîches (jour 0).

Figure 7. Corrélation entre les lectures métagénomiques bactériennes en double utilisant (A) des selles fraîches (jour 0) et des selles conservées à la température ambiante pendant 2 jours et (B) des selles fraîches (jour 0) et des selles non conservées à la température ambiante pendant 2 jours. Un R2 plus important a été observé pour les selles fraîches (jour 0) et les selles conservées, ce qui suggère une plus grande cohérence entre les échantillons de selles fraîches et les échantillons de selles conservées.