Dispositivos de recogida y conservación de ADN de la saliva Dx
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Supporting Data
Figure 1. Stability of DNA Preserved in Norgen's Saliva DNA Preservative at Room Temperature for up to 75 Months.
Saliva samples were collected from numerous donors and mixed, and then an equal volume of Norgen's Saliva DNA Preservative was added to the saliva. The preserved saliva was then stored at room temperature for up to 75 months. Saliva DNA was subsequently isolated at 1 week, 3 weeks, 1 month, 2 months, 4 months, 6 months, 8 months, 12 months, 20 months, 32 months, 40 months, 52 months and 75 months from 0.5 mL of the saliva/preservative sample using Norgen's Saliva DNA Isolation Kit (Cat. RU45400). For visual analysis, 100 µL of the purified DNA was run on an agarose TAE gel. As it can be seen, there is no evidence of DNA degradation after the saliva samples are stored for 75 months at ambient temperatures in Norgen's Saliva DNA Preservative. Furthermore, the size of the DNA was maintained over 24 kb for the entire 75-month period. M: Norgen's UltraRanger 1 Kb DNA Ladder (Cat. 12100).
Figure 2. GAPDH Real Time PCR Amplification of Saliva DNA from Saliva Samples Stored at Room Temperature from Day 0 up to 24 Months.
All isolated saliva DNA samples were successfully amplified without any sign of PCR inhibition and difference in Ct. Red: Day 0, Blue: 4 months, Purple: 8 months, Green: 16 months and Sky blue: 24 months. Black: No template control.
Figure 3. GAPDH Real Time PCR Amplification of Saliva DNA from Saliva Samples Stored at Room Temperature from Day 0 up to 24 Months.
All isolated saliva DNA samples were successfully amplified without any sign of PCR inhibition and difference in Ct. Red: Day 0, Blue: 4 months, Purple: 8 months, Green: 16 months and Sky blue: 24 months. Black: No template control.
Figure 4. V3-V4 16s rRNA PCR amplification for Illumina MiSeq 16s rRNA library preparation.
The saliva DNA was isolated using Norgen's Saliva DNA Isolation Kit (Cat. RU45400) from saliva that had been preserved for various periods of time up to 2 years at room temperature in Norgen’s Saliva DNA Preservative. The PCR result shows the clean PCR amplification at ~550 bp indicating the right target of V3-V4 16s rRNA , with no difference between day 0 and 24 months. M: FastRunner DNA Ladder (Cat. 12800).
Figura 1. Estabilidad del ADN conservado en el conservante de ADN de saliva de Norgen a temperatura ambiente durante más de 2 años. Se recogieron muestras de saliva de numerosos donantes, se mezclaron y, a continuación, se añadió a la saliva un volumen igual de conservante de ADN para saliva de Norgen. A continuación, la saliva conservada se almacenó a temperatura ambiente durante un máximo de 24 meses. Posteriormente, se aisló ADN de saliva a los 4, 8, 16 y 24 meses a partir de 0,5 mL de la muestra de saliva/conservante utilizando el kit de aislamiento de ADN de saliva de Norgen (Cat. RU45400). Para el análisis visual, se pasaron 100 µl del ADN purificado en un gel TAE de agarosa. Como puede observarse, no hay indicios de degradación del ADN después de almacenar las muestras de saliva durante 24 meses a temperatura ambiente en el conservante de ADN de saliva de Norgen. Además, el tamaño del ADN se mantuvo por encima de 24 kb durante todo el periodo de 24 meses. M: Escala de ADN UltraRanger 1 Kb de Norgen (Cat. 12100).
Figura 2. Amplificación por PCR en tiempo real de GAPDH del ADN de muestras de saliva almacenadas a temperatura ambiente desde el día 0 hasta los 24 meses. Todas las muestras de ADN de saliva aisladas se amplificaron con éxito sin ningún signo de inhibición de la PCR ni diferencia en Ct. Rojo: Día 0, Azul: 4 meses, Púrpura: 8 meses, Verde: 16 meses y Azul cielo: 24 meses. Negro: No hay control de plantillas.
Figura 3. Amplificación por PCR de ARNr 16s V3-V4 para la preparación de bibliotecas de ARNr 16s Illumina MiSeq. El ADN de saliva se aisló utilizando el kit de aislamiento de ADN de saliva de Norgen (Cat. RU45400) de saliva que había sido conservada durante varios periodos de tiempo de hasta 2 años a temperatura ambiente en Conservante de ADN de Saliva de Norgen. El resultado de la PCR muestra la amplificación limpia de la PCR a ~550 pb indicando la diana correcta de V3-V4 ARNr 16s , sin diferencias entre el día 0 y los 24 meses. M: Escalera de ADN FastRunner (Cat. 12800)
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Especificaciones del kit
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Volumen de saliva recogida
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2 mL
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Volumen de la mezcla de saliva y conservante
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4 mL
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Temperatura de conservación
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Temperatura ambiente
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Más de 2 años a temperatura ambiente
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Conservación y manipulación
- El dispositivo de recogida debe mantenerse herméticamente cerrado y almacenado a temperatura ambiente durante un máximo de 3 años sin que se reduzca el rendimiento del kit (la fecha límite de recogida está escrita en la etiqueta del dispositivo).
- Una vez recogida, la saliva es estable durante más de 2 años si se mantiene herméticamente cerrada y almacenada a temperatura ambiente.
- El tubo de recogida, el embudo de recogida y el recipiente de cada dispositivo individual de recogida y conservación de ADN de saliva son reciclables.
Documentation
- in a timely manner that considers the person's accessibility needs due to disability; and
- at a cost that is no more than the regular cost charged to other persons