Dispositivos de recogida y conservación de ARN de la saliva
Para la recogida sencilla y no invasiva de saliva y la conservación del ARN en muestras de saliva a temperatura ambiente.
Dispositivos de recogida y conservación de ARN de la saliva
Para la recogida sencilla y no invasiva de saliva y la conservación del ARN en muestras de saliva a temperatura ambiente.
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Figura 1. Estabilidad del ARN conservado en el conservante de ARN de saliva de Norgen a temperatura ambiente durante un máximo de 2 meses. Se recogieron muestras de saliva de numerosos donantes, se mezclaron y, a continuación, se añadió a la saliva un volumen igual de conservante de ARN salival de Norgen. A continuación, la saliva conservada se almacenó a temperatura ambiente durante un máximo de 2 meses. Posteriormente, se aisló el ARN de la saliva en el día 0, día 4, día 6, día 16, 1 mes y 2 meses a partir de 0,25 mL de la muestra de saliva/conservante utilizando el protocolo complementario asociado al kit de purificación de ARN total de Norgen (Cat. 17200). Para el análisis visual, 7,5 µl de 50 µl de elución se mezclaron con colorante de carga de ARN y se corrieron en un gel de agarosa MOPS1x. La integridad del ARN se mantuvo después de que las muestras de saliva se conservaran hasta 2 meses a temperatura ambiente en conservante de ARN de saliva de Norgen.
Figura 2. Estabilidad de tres genes de mantenimiento durante un periodo de 2 meses. Los genes GAPDH, ARNr 18S humano y beta actina se monitorizaron a partir de muestras de saliva almacenadas a temperatura ambiente con el conservante de ARN de saliva de Norgen. Se aisló el ARN de 250 µl de muestras conservadas el día 0, el día 4, el día 6, el día 10, el día 16, el día 30 y el día 60 utilizando el kit de purificación de ARN total de Norgen (Cat. 17200). A continuación, se utilizaron 4 µl de elución en 20 µl de la reacción de PCR en tiempo real (SYBR Green I) utilizando el sistema de detección de PCR en tiempo real CFX96 TouchTM (Bio-Rad). Todos los genes se conservaron y se mantuvieron estables durante 2 meses.
Figura 3. El conservante de ADN de saliva de Norgen es capaz de preservar con éxito muestras de ARN de saliva cuando se utiliza fuera del rango ideal de 1:1 a temperatura ambiente durante 3 días. A medida que la cantidad de saliva añadida a 2 mL de conservante de ARN salival aumentaba de 0,2 mL a 3 mL, se controló la estabilidad del ARN mediante RT-PCR de un paso de la proteína RNasa y el gen β-actina. Los resultados indicaron que la variación de los volúmenes de entrada de saliva no influyó significativamente en la detección del gen ARN.
Figura 4. Detección de ARN viral, bacteriano y humano a partir de muestras de saliva conservadas. La saliva (2 mL) recogida de un único donante sano se mezcló con 2 mL de conservante de ARN de saliva. Control positivo COVID-19 de Norgen del kit 2019-nCoV TaqMan RT-PCR (gen E/RdRP) (Cat. TM67200) en la saliva conservada junto con células HeLa (1,6 m células /ml ) para generar una muestra artificial. A partir de la muestra artificial, se purificó el ARN total utilizando el kit de purificación de ARN total de Norgen (Cat. 17200) y 5 genes (16s ARNr, gen COVID-19 E, genes RdRP-P1 y P2 y RP) fueron analizados por PCR o RT-PCR para detectar genes virales, bacterianos y humanos.
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Especificaciones del kit
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Volumen de saliva recogida
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2 mL
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Volumen de la mezcla de saliva y conservante
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4 mL
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Temperatura de conservación
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Temperatura ambiente
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| Tiempo de conservación |
Hasta 2 meses a temperatura ambiente
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Conservación y manipulación
- Cuando se almacenan a temperatura ambiente, los tubos conservantes de saliva de Norgen no utilizados son estables hasta la fecha de caducidad sin ninguna reducción en su rendimiento. Consulte la fecha de caducidad en el prospecto o en la etiqueta del tubo.
- Una vez recogido, el ARN de saliva es estable durante un máximo de 2 meses si se mantiene herméticamente cerrado y almacenado a temperatura ambiente.
- El tubo de recogida, el embudo de recogida y el recipiente de cada dispositivo individual de recogida y conservación de ADN de saliva son reciclables.