细胞质/核 RNA 纯化
用于从培养的细胞和组织中纯化细胞质和核 RNA
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细胞质/核 RNA 纯化
用于从培养的细胞和组织中纯化细胞质和核 RNA
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图 1.有效分离 HeLa 细胞的细胞质与核 RNA。Norgen 的细胞质和核 RNA 纯化试剂盒用于从 0.75 万个 HeLa 细胞中有效分离细胞质和核 RNA,每次分离三份。A 组:使用 Norgen 试剂盒纯化了优质细胞质和细胞核 RNA。注意细胞质和细胞核 RNA 的完整性和质量。在 1.5% 甲醛-琼脂糖凝胶上运行每 50 µL 洗脱液中的 10 µL。M 泳道为 Norgen 的 1 kb RNA 梯,1-3 道为核 RNA,4-6 泳道为细胞质 RNA。B 组:用 Norgen 试剂盒从 HeLa 细胞中分离出 10 μL 上述细胞质和细胞核 RNA,然后在 0.9% 琼脂糖 DNA 凝胶上检测。核 RNA 产物(1-3 泳道)中可以清楚地看到基因组 DNA,但在细胞质 RNA 产物(4-6 泳道)中检测不到基因组 DNA。请注意,我们提供了可选的柱上 DNase 处理方案,以去除核馏分中的基因组 DNA。
图 2.超强分离 HeLa 细胞的细胞质和核 RNA。与竞争对手的主要产品相比,Norgen 的细胞质和核 RNA 纯化试剂盒能更好地从 0.8 百万 HeLa 细胞中分离出细胞质和核 RNA。A 组:使用 Norgen 试剂盒和竞争对手的试剂盒从 HeLa 细胞中纯化的细胞质和细胞核 RNA。在 1.5% 甲醛-琼脂糖凝胶上分别取 10 µL 细胞质(C)或细胞核(N)RNA 的 50 µL 洗脱液(Norgen 或竞争对手试剂盒)。使用 Norgen 试剂盒分离出的 RNA 产率更高,完整性更好。B 组:用 Norgen 试剂盒和竞争对手试剂盒从 HeLa 细胞中分离出 10 μL 的细胞质和细胞核 RNA,在 0.9% 琼脂糖凝胶上检测。基因组 DNA 只与使用诺健细胞质与核 RNA 纯化试剂盒分离的 RNA 中的核部分发生共迁移,而不与细胞质部分发生共迁移。请注意,我们提供了可选的柱上 DNase 处理方案,以去除核馏分中的基因组 DNA。与此相反,使用竞争对手试剂盒分离的 RNA 的细胞质部分出现了严重的基因组 DNA 污染。
图 3.不含基因组 DNA 的细胞质 RNA。使用 Norgen 的细胞质与核 RNA 纯化试剂盒从 100 万个 HeLa 细胞中分离出 50 µL 的细胞质 RNA,使用人β 肌动蛋白引物对其中的 2 µL 进行 RT-PCR 扩增。M 泳道是 Norgen 的聚合酶链式反应Sizer DNA 梯子,泳道 1 和 3 是阴性对照(仅 PCR,无反向转录),2 和 4 泳道是实际 RT-PCR,显示预期的 166 bp RT-PCR 产物。基因拷贝的预期扩增片段大小与 RNA 转录本相同。1 和 3 泳道中没有产物,说明分离的细胞质 RNA 中没有基因组 DNA 污染。所有聚合酶链式反应产物均在 1X TAE、2% 琼脂糖凝胶上分离。
图 4.细胞质和核转录本的特异性分离和后续扩增。Norgen 的细胞质和核 RNA 纯化试剂盒能有效分离细胞质和核 RNA。使用 Norgen 的细胞质与核 RNA 纯化试剂盒从 100 万个 HeLa 细胞中分离出 0.5 µg 的细胞质或核 RNA 产物,使用人 U2 snRNA(A 组)或 S14(B 组)引物进行 RT-PCR。在面板 A 中,当使用核特异性 U2 snRNA 引物时,仅在核部分观察到强烈的聚合酶链式反应产物。在 B 组中,在细胞质部分观察到了 S14 的看家转录本的大部分聚合酶链式反应产物。这两项结果表明,使用 Norgen 的细胞质和核 RNA 纯化试剂盒可以有效分离细胞质和核 RNA。所有聚合酶链式反应产物均在 1X TAE、1.5% 琼脂糖 DNA 凝胶上分离。
试剂盒规格
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最大色谱柱结合能力
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高达 50 µg RNA
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最大色谱柱装载量
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650 µL
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纯化的 RNA 大小
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所有大小,包括小 RNA(< 200 nt)
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完成 10 次净化所需时间 |
45 分钟
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RNA 产量
HeLa (1 x 106) - 细胞质 RNA HeLa (1 x 106) - 核 RNA |
15 µg ≤ 3.5 µg |
储存条件和产品稳定性
所有溶液都应密封保存在室温下。该试剂盒自发货之日起 2 年内保持稳定。