噬菌体 DNA 分离试剂盒

概述

该试剂盒提供了一种快速旋转柱法，可从在液体培养物中生长的细菌中繁殖的多种噬菌体中纯化总 DNA。DNA 的分离无需使用苯酚、氯仿或氯化铯带状程序。这种基于旋转柱的程序非常快速，可在 45 分钟内完成。该试剂盒可高效处理小体积噬菌体上清液（500 µL - 1 mL），通过可选的 DNase 和蛋白酶 K 处理，可最大限度地提高噬菌体 DNA 产量，同时将宿主 DNA 污染降至最低。纯化的总噬菌体 DNA 具有最高的完整性，可用于多种下游应用，包括 PCR、qPCR、限制性片段长度多态性 (RFLP)、测序、克隆、Southern 印迹等。

细节

支持数据

图 1.有效去除宿主基因组 DNA，同时不降低噬菌体 DNA 产量使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离出总 DNA。在加入所提供的裂解缓冲液之前，先进行 DNase I 预处理。简而言之，在 1 mL 富集的噬菌体培养液中加入 20 个单位的 DNase I，然后将混合物在室温下培养 20 分钟。DNA 酶 I 处理后，按程序进行。作为对照，使用 Norgens 噬菌体 DNA 分离试剂盒从相同的 4 个培养物中分离出 DNA，但未进行 DNase I 处理。为了进行 DNA 分析，将每 50 µL 洗脱液中的 10 µL 加载到 1X TAE 琼脂糖凝胶上。由此可见，噬菌体 DNA 在其外壳蛋白的保护下安全地免受 DNase I 处理，而宿主基因组 DNA 则被 DNase I 有效降解。M 泳道为 Norgen's Highranger 1 kb DNA Ladder（类别号：11900)

图 2.可选的蛋白酶 K 处理可提高某些噬菌体菌株的 DNA 产量。使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒分离了经蛋白酶 K 处理和未经蛋白酶 K 处理的总 DNA。简而言之，在 1 mL 富集噬菌体培养液中加入 4 µL 蛋白酶 K（20 mg/mL），然后与噬菌体裂解缓冲液一起在 55°C 孵育 15 分钟。蛋白酶 K 处理后，按照程序进行。作为对照，使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从相同的 8 个培养物的等分中分离出 DNA，但未进行蛋白酶 K 处理。为了进行 DNA 分析，将每 50 µL 洗脱液中的 10 µL 加载到 1X TAE 琼脂糖凝胶上，比较八种不同类型噬菌体（第 1 至第 8 泳道）的 DNA 产量。可以看出，蛋白酶 K 的可选处理大大提高了 2、5 和 6 泳道中噬菌体 DNA 的产量。M 泳道为 Norgen's Highranger 1 kb DNA Ladder（类别号：11900)

试剂盒规格
色谱柱结合能力	50 µg
最大色谱柱装载量	650 µL
纯化的 DNA 大小	所有大小
起始材料的最大用量	1 x 10¹⁰ pfu/mL 富集噬菌体
平均产量*	3-15 µg de ADN a partir de 10⁶-10¹⁰ pfu/mL 丰富的噬菌体
完成 10 次净化所需时间	45 分钟