Tubes de conservation ADN-cf/ARN-cf

Figure 2. Pas de perte de volume plasmatique après expédition/transport. Le sang a été prélevé en double sur 6 donneurs différents. Une série a été conservée dans le laboratoire à température ambiante et l'autre a été emballée dans une boîte isolée et expédiée de Thorold, ON par fret aérien de nuit jusqu'à Winnipeg, MB, puis de nouveau jusqu'à Thorold, ON (temps écoulé 72 h). À leur retour, les échantillons conservés ont été stockés à température ambiante pendant 7 jours avant que le plasma ne soit séparé. Le volume de plasma récupéré dans les tubes de conservation cf-DNA/cf-RNA de Norgen n'a pas changé avant ou après l'expédition (6 à 7 mL de plasma récupéré). Pour les tubes Competitor et les tubes EDTA, le volume de plasma récupéré avant expédition était de ~ 4 ml et après expédition de ~ 2,5 mL.

Figure 3. Hémolyse du sang prélevé mesurée dans le temps. Des échantillons de sang ont été prélevés dans : 1) Tubes EDTA, 2) Tubes concurrents et 3) Tubes conservateurs cf-DNA/cf-RNA de Norgen et conservés jusqu'à 30 jours. L'hémolyse a été déterminée en mesurant l'absorption de l'hémoglobine libre dans le plasma de 3 sujets à 414 nm sur plusieurs points dans le temps. L'absorption moyenne est indiquée. La quantité d'hémoglobine libre a augmenté rapidement avec chaque jour de stockage supplémentaire dans les tubes EDTA et les tubes Competitor, et est restée relativement constante dans les tubes de conservation cf-DNA/cf-RNA de Norgen.

Figure 4. Prévenir la lyse cellulaire, la libération de l'ADNg et l'accumulation de l'échelle apoptotique dans le plasma. Échantillons de sang prélevés dans trois tubes différents (tubes de conservation cf-ADN/ARN-ARN de Norgen, EDTA et Competitor) et stockés jusqu’à 30 jours. Les tubes conservateurs cf-DNA/cf-RNA de Norgen permettent d'éviter la libération d'ADNg de haut poids moléculaire dans le plasma tout en minimisant l'accumulation d'échelle apoptotique contaminante provenant des leucocytes mourants du sang périphérique. Comme l'indique le cercle noir, la contamination par l'ADNg est très faible par rapport aux tubes concurrents et d'EDTA. Cela indique que les niveaux de lyse cellulaire sont très faibles et que l'ADNg est ensuite libéré dans l'échantillon de plasma préservé.

Figure 5. Effet du stockage à haute température (37°C) pendant 8 jours. Les échantillons de sang ont été prélevés dans des tubes d'EDTA, des tubes Competitor ou des tubes de conservation ADN-cf/ARN-cf de Norgen et conservés à 37°C. L’ADN-cf a ensuite été isolé à partir du plasma traité. La concentration d'ADNg a été déterminée par PCR en temps réel en utilisant une cible longue du gène ALU (247 pb). L'ADNg - cible dans les tubes EDTA a montré une baisse significative de la valeur Ct. après 1 jour de stockage à 37°C par rapport au point de temps initial, et a continué à baisser jusqu'au 8ième jour de stockage. Pour le concurrent, l'ADNg - cible est resté stable jusqu'au 4ième jour de stockage, puis les valeurs Ct. ont commencé à chuter de manière significative, ce qui indique une faible stabilisation au-delà du 4ième jour. Les tubes de conservation ADN-cf/ARN-cf de Norgen ont stabilisé les échantillons pendant 8 jours.

Figure 6. Grande quantité d'ADN-cf du plasma conservée à l'aide des tubes de conservation de l'ADNcf/ARN-cf de Norgen Dx. Des échantillons de sang du même donneur ont été prélevés dans des tubes Competitor ou dans des tubes de conservation ADN-cf/ARN-cf de Norgen et conservés à température ambiante pendant 7 jours. Le tube de conservation ADN-cf/ARN-cf de Norgen a permis de récupérer 6,5 mL de plasma, tandis que le tube du concurrent a permis de récupérer 3,5 mL de plasma. L'ADN-cf a ensuite été isolé à partir de l'ensemble du volume de plasma récupéré dans chaque tube à l'aide du kit Midi de purification de l'ADN circulant exempt de cellules du plasma/sérum de Norgen (Cat. 55600) et le kit Maxi de purification de l'ADN circulant exempt de cellules du plasma/sérum de Norgen (Cat. 55800). La quantité d’ADN récupérée à partir des deux échantillons a été évaluée à l’aide de la puce à ADN haute sensibilité du bioanalyseur Agilent. Comme le montre la trace du bioanalyseur, le tube de conservation de Norgen a produit plus d'ADNcf (pic bleu) que l'ADNcf récupéré dans le tube de conservation du concurrent.

Figure 7. Effet de la conservation à température ambiante sur l'ARNcf, illustré par le transcrit de l'ARNr 18S, le transcrit de l'ARNm HPRT1 et le miR-21. Des échantillons de sang ont été prélevés dans l'une ou l'autre des deux catégories suivantes : 1) Tubes de concurrents ou 2) Tubes de conservation d’ADN-cf/ARN-cf de Norgen. Les tubes des concurrents ont été conservés à température ambiante pendant 14 jours, tandis que les tubes de conservation d’ADN-cf/ARN-cf de Norgen ont été conservés pendant 30 jours à température ambiante. Aux moments indiqués, chaque tube a été traité et le plasma a été séparé. L'ARN-cf a été isolé et la stabilité de l'ARN-cf purifié a été déterminée par amplification rt-qPCR ciblant le transcrit de l'ARNr 18S, le transcrit de l'ARNm HPRT1 et le miR-21. Les niveaux de ces trois cibles devraient rester inchangés pendant la durée indiquant une stabilisation. Le concurrent a montré des valeurs Ct significativement plus élevées pour les trois cibles après 7 jours, indiquant une dégradation de l'ARN-cf, alors que l'ARN-cf est resté stable pendant 30 jours à température ambiante pour les tubes de conservation ADN-cf/ARN-cf de Norgen.

Figure 8. Effet du stockage à température ambiante sur la conservation des protéines plasmatiques pendant 30 jours. Les échantillons de sang ont été prélevés dans des tubes de conservation d'ADNcf/ARNcf de Norgen et ont été conservés pendant 30 jours à température ambiante. Aux moments indiqués, chaque tube a été traité pour la récupération du plasma et les protéines ont été purifiées à partir de 50 µL de plasma en utilisant le kit de déplétion des protéines du sérum abondant Norgens ProteoSpin™ (Cat. 17300) . La stabilité des protéines plasmatiques purifiées A) appauvries et B) très abondantes a été évaluée sur un gel SDS-PAGE à 12 %. Les protéines plasmatiques appauvries et les protéines plasmatiques très abondantes se sont révélées stables pendant 30 jours à température ambiante sans aucun signe de dégradation des protéines.