Kits de purification de l'ARN du plasma/sérum Pour une purification rapide et simple de l'ARN circulant et de l'ARN exosomal à partir d'échantillons de plasma/sérum Kits de purification de l'ARN du plasma/sérum Pour une purification rapide et simple de l'ARN circulant et de l'ARN exosomal à partir d'échantillons de plasma/sérum SKU FR-55000 Variations Format Mini Midi Maxi Size 50 préparations Quantity Trouver un distributeur Contact Aperçu du produit Détails Citations Aperçu du produit Ces kits constituent une méthode rapide, fiable et pratique pour purifier et concentrer l'ARN circulant et exosomal de haute qualité, de grande pureté et exempt d'inhibiteurs, à l'aide d'une méthode pratique de colonne de spin. Ces kits peuvent purifier l’ARN à partir d’échantillons de sérum ou de plasma frais ou congelés préparés à partir de sang prélevé sur EDTA ou citrate. Les échantillons de plasma préparés à partir de sang collecté sous héparine ne doivent pas être utilisés, car l'héparine peut interférer de manière significative avec de nombreuses applications en aval telles que la RT-PCR. L'ARN purifié du plasma/sérum est entièrement compatible avec toutes les applications en aval, y compris la PCR, la qPCR, la transcription inverse sensible à la méthylation, la PCR en transcription inverse, le transfert de Northern, la protection par la ribonucléase et l'extension des amorces, les essais de réseaux d'expression et la NGS. Contexte L'ARN circulant sans cellule du plasma/sérum ou l'ARN exosomal a le potentiel de fournir des biomarqueurs pour certains cancers et états pathologiques. Les exosomes sont des vésicules membranaires de 40 à 150 nm, sécrétées par la plupart des types de cellules. Les exosomes peuvent être trouvés dans la salive, le sang, l'urine, le liquide amniotique et les fluides ascitiques malins, entre autres fluides biologiques. Les preuves se sont accumulées récemment que ces vésicules agissent comme des messagers cellulaires, transmettant des informations à des cellules et tissus éloignés dans l'organisme. Ces exosomes peuvent jouer un rôle fonctionnel dans la médiation des réponses immunitaires adaptatives aux agents infectieux et aux tumeurs, la réparation des tissus, la communication neuronale et le transfert de protéines pathogènes. Pour cette raison, les ARN exosomiques peuvent servir de biomarqueurs pour diverses maladies, y compris le cancer. Comme les molécules d'ARN encapsulées dans les exosomes sont protégées de la dégradation par les ARN, elles peuvent être récupérées efficacement dans les fluides biologiques, tels que le plasma ou le sérum. Kit Mini de purification de l'ARN du plasma/sérum Ce kit permet de purifier l'ARN à partir d'échantillons de sérum ou de plasma frais ou congelés, préparés à partir de sang prélevé sur EDTA ou citrate, dans des volumes allant de 50 µL à 200 µL. L'ARN purifié du plasma/sérum est élué dans un volume final flexible de 10 µL à 25 µL. Kit Midi de purification de l'ARN du plasma/sérum Ce kit utilise deux méthodes de colonnes et permet de purifier l'ARN à partir d'échantillons de sérum ou de plasma frais ou congelés, préparés à partir de sang prélevé sur EDTA ou sur citrate, dans des volumes allant de 250 µLà 1,5 mL. La première colonne traitera le grand volume d'entrée des fluides corporels, suivi d'une concentration sur une mini-colonne pour une élution finale de 50 µL à 100 µL. Kit Maxi de purification de l'ARN du plasma/sérum Ce kit permet de purifier l'ARN à partir d'échantillons de sérum ou de plasma frais ou congelés, préparés à partir de sang prélevé sur EDTA ou Citrate, dans des volumes allant de 2 mL à 5 mL. La première colonne traitera le grand volume d'entrée des fluides corporels, suivi d'une concentration sur une mini-colonne pour une élution finale de 50 µL à 100 µL. Isolement de l'ARN après purification des VE et des exosomes Pour l'ultracentrifugation, l'Exoquick et la filtration Cat. # Nom Volume d'élution Plasma/sérum Urine Milieux de culture cellulaire 55000 Kit Mini de purification d'ARN du plasma/sérum 10 à 25 µL 50 µL à 1 mL 250 µL à 1 mL 5 à 10 mL 35300 Kit Midi de purification d'ARN du plasma/sérum 20 à 50 µL 1 à 4 mL 2 à 10 mL 10 à 20 mL 17200 Kit Total de purification d'ARN 50 à 100 µL 4 à 10 mL 11 à 30 mL 20 à 35 mL Détails Données justificatives Previous Figure 1. Purification de l'ARN circulant à partir de différents volumes de plasma. Le mini kit de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen a été utilisé pour purifier l'ARN circulant à partir de 50 µL, 100 µL et 200 µL de plasma préparé à partir de sang collecté sur EDTA. Trois microlitres de l'ARN purifié ont ensuite été utilisés comme modèle dans les réactions de RT-qPCR pour détecter le miR-21 (figure 1A) et le transcrit de l'ARNr 5S (figure 1B). La quantité relative du miR-21 (figure 1A) et du transcrit de l'ARNr 5S (figure 1B) augmente de façon linéaire avec l'augmentation du volume d'entrée de l'échantillon. Figure 2. Élution de l'ARN circulant purifié dans différents volumes d'élution. Le kit mini de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen a été utilisé pour purifier l'ARN circulant à partir de 200 µL de plasma préparé à partir de sang collecté sur EDTA et élué dans 10 µL, 15 µL et 25 µL. Trois microlitres de l'ARN purifié ont ensuite été utilisés comme modèle dans des réactions de RT-qPCR pour détecter le miR-21 (figure 2A) et le transcrit de l'ARNr 5S (figure 2B). La quantité relative du miR-21 (figure 2A) et du transcrit de l'ARNr 5S (figure 2B) augmente avec le volume d'élution, ce qui indique une concentration efficace de l'ARN circulant dans le plasma dans un volume d'élution très faible. Figure 3. Détection efficace et cohérente des ARN micro dans le plasma. Le kit mini de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen permet d'isoler efficacement l’ARN micro du plasma. Les ARN micro circulants ont été isolés à partir de 200 µL de plasma à l'aide du mini kit de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen, du kit de son concurrent Q et du kit de son concurrent E. Les ARN micro circulants ont été isolés à partir de 600 µL à l'aide du kit du concurrent A. Une RT-qPCR en boucle de tige utilisant des amorces spécifiques à miR-21 a été réalisée. En bref, 1 microlitre des 15 µL d'ARN purifié à l'aide du kit mini de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen, du kit du concurrent Q et 3,3 microlitres des 50 µL d'ARN purifié à l'aide du kit du concurrent E et du kit du concurrent A ont ensuite été soumis à une transcription inverse de 20 µL à l'aide de l'amorce inverse de la boucle souche miR-21. Trois microlitres de la transcription inverse ont été utilisés dans une réaction PCR en temps réel de 20 µL avec des amorces pour détecter le miR-21 humain. Le mini kit de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen a montré la récupération la plus cohérente et la plus élevée des transcrits miR-21 par rapport aux autres méthodes d'isolation. La récupération d’ARN micro à partir de 200 µL de plasma à l'aide du kit de Norgen était supérieure à celle obtenue à partir de l'ARN purifié à partir de 600 µL à l'aide du kit du concurrent A. Figure 4. Les séquences de petits ARN à partir d’aussi peu que 50 μL de plasma. Norgen Biotek a développé un pipeline efficace pour le séquence de petits ARN à partir de petits volumes de plasma/sérum. L'ARN peut être récupéré de manière efficace et cohérente à partir de seulement 50 µL de plasma en utilisant la technologie de préparation d'échantillons brevetée de Norgen (exemple montré ici avec le mini kit de purification de l'ARN du plasma/sérum, Cat. 55000). Le panneau A montre que le nombre de microARN détectés à partir de 50 ou 200 µl de plasma était presque identique à celui de 4 ml. Le panneau B est un diagramme de Venn montrant que la majorité des ARN micro identifiés sont détectés dans tous les volumes de plasma entrant, de 50 µl à 4 ml. En fait, les diagrammes de dispersion du panneau C montrent que le niveau d'expression relative de chaque ARN micro détecté était fortement corrélé entre 50 ou 200 µl de plasma et 4 ml de plasma. Figure 5. Degré élevé de chevauchement du profil ARN micro entre l'urine et le plasma. Du plasma et de l'urine à mi-parcours ont été prélevés sur trois individus sains différents. L'ARN a été isolé à partir de 20 mL de chaque échantillon d'urine à l'aide du kit de purification de l'ARN exosomal de l'urine de Norgen (Cat. 47200) et 200 µL de chaque échantillon de plasma en utilisant le mini kit de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen (Cat. 55000). Des petites bibliothèques d'ARN ont ensuite été générées à l'aide d'un kit de préparation de petites bibliothèques d'ARN TruSeq d'Illumina, puis séquencées sur un système MiSeq d'Illumina. La liste des ARN micro cartographiés provenant du plasma et de l'urine d'un même individu a ensuite été comparée. Les diagrammes de Venn ont montré que les profils de ARN micro se chevauchent largement entre l'urine et le plasma pour chaque individu. Figure 6. Diversité accrue d'autres espèces de petits ARN (interagissant avec Piwi) dans l'urine. Du plasma et de l'urine à mi-parcours ont été prélevés sur trois individus sains différents. L'ARN a été isolé à partir de 20 ml de chaque échantillon d'urine à l'aide du kit de purification de l'ARN exosomal de l'urine de Norgen (Cat. 47200) et 200 µL de chaque échantillon de plasma en utilisant le mini kit de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen (Cat. 55000). Des petites bibliothèques d'ARN ont ensuite été générées à l'aide d'un kit de préparation de petites bibliothèques d'ARN TruSeq d'Illumina, puis séquencées sur un système MiSeq d'Illumina. Le graphique ci-dessus montre que la proportion relative d'ARN interagissant avec piwi (ARNpi) est systématiquement plus élevée dans l'urine. Figure 7. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen isole les ARN micro des cellules HeLa avec une meilleure diversité qu'un concurrent de premier plan. L'ARN total, y compris les ARN micro, a été isolé à partir d'un million de cellules HeLa à l'aide du kit de purification de l'ARN total de Norgen et du kit ARN micro de Competitor Q. Il a ensuite été utilisé pour le séquence de la prochaine génération des petits ARN d'Illumina sur un séquenceur MiSeq. Le panneau A montre que le kit de purification de l'ARN total de Norgen récupère un plus grand nombre d’ARN micro que son concurrent. En particulier, la plus grande diversité est obtenue grâce à une procédure plus rapide et plus simple, en seulement 20 minutes de temps de préparation de l'échantillon d'ARN, sans utilisation de phénol. Le panneau B est un diagramme de dispersion du RPM moyen (lectures par million) des ARN micro détectés pour comparer la récupération des ARN micro par Norgen et par les concurrents. Le kit de purification de l'ARN total de Norgen a récupéré un nombre significativement plus élevé d’ARN micro ayant des LPM plus élevées, comme le résument le graphique et le panneau C. Figure 8. Purification de l'ARN circulant acellulaire et de l'ARN exosomal à partir de différents volumes de plasma.Le kit Midi de purification de l'ARN du plasma/sérum Norgens (Cat# 56100) a été utilisé pour purifier l'ARN circulant et exosomal acellulaire à partir de 0,25 mL, 0,75 mL et 1,5 mL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant. Deux microlitres de l'ARN purifié ont ensuite été utilisés comme modèle dans des réactions de RT-qPCR pour évaluer l'amplification du transcrit de l'ARNr 5S de base (A) et du miR-21 (B). La valeur moyenne de Ct pour le transcrit de l'ARNr 5S et le miR-21 diminue de façon linéaire avec l'augmentation du volume d'entrée de l'échantillon. Figure 9. Linéarité de l'ARN purifié à partir de volumes croissants de plasma à l'aide du kit Midi de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen.. Le kit Midi de purification de l'ARN du plasma/sérum Norgen (Cat# 56100) a été utilisé pour purifier l'ARN à partir de 0,25 mL, 0,7 mL et 1,5 mL de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant. Deux microlitres de l'ARN purifié ont ensuite été utilisés comme modèle dans les réactions de RT-qPCR pour évaluer la linéarité (A) du transcrit de l'ARNr 5S de référence et (B) du miR-21 à partir des différents volumes de plasma. Le kit Midi de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen a permis de récupérer 97 % du transcrit de l'ARNr 5S et du transcrit du miR-21 à partir de 0,75 mL de plasma par rapport à la quantité présente dans 0,35 mL de plasma. En outre, 95 % du transcrit de l'ARNr 5S et du miR-21 ont été récupérés à partir de 1,5 mL de plasma par rapport à la quantité présente dans 0,75 mL de plasma. Figure 10. Détermination de la quantité d'inhibition présente dans les échantillons d'ARN plasmatique lors de la détection du transcrit 5S humain et du miR-21. L'ARN a été isolé à partir de 0,25 ml, 0,75 ml et 1,5 ml de plasma à l'aide du kit Midi de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen (Cat# 56100). Des volumes croissants de l'élution (2, 4 et 8 µl) ont été utilisés dans une réaction de transcription inverse de 20 µl suivie d'une réaction d'amplification par qPCR afin d'observer toute diminution de la valeur Ct. Une augmentation des valeurs Ct avec l'augmentation de la quantité de matrice serait une indication claire de la présence d'inhibiteurs de la PCR dans l'échantillon. Une augmentation du volume d'entrée de la PCR utilisée comme modèle dans la réaction de transcription inverse n'a pas affecté la valeur Ct générée par l'amplification qPCR pour (A) le transcrit de l'ARNr 5S et (B) le miR-21. En fait, les valeurs Ct ont tendance à diminuer avec l'augmentation du volume d'entrée de la PCR, ce qui indique que l'ARN purifié à partir du plasma à l'aide du kit Norgen est exempt des inhibiteurs courants habituellement présents dans le plasma. Figure 11. Purification de l'ARN circulant acellulaire et de l'ARN exosomal à partir de différents volumes de plasma. Le kit Maxi de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen (Cat# 56200) a été utilisé pour purifier l'ARN circulant et exosomal exempt de cellules à partir de 1,5 ml, 3 ml et 5 ml de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant. Deux millilitres de l'ARN purifié ont ensuite été utilisés comme modèle dans des réactions de RT-qPCR pour évaluer l'amplification (A) du transcrit de l'ARNr 5S de référence et (B) du miR-21. La valeur moyenne de Ct pour le transcrit de l'ARNr 5S et le miR-21 diminue de façon linéaire avec l'augmentation du volume d'entrée de l'échantillon. Figure 12. Linéarité de l'ARN purifié à partir de volumes croissants de plasma à l'aide du kit Maxi de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen. Le kit Maxi de purification de l'ARN circulant et exosomal exempt de cellules du plasma/sérum de Norgen (Cat# 56200) a été utilisé pour purifier l'ARN à partir de 1,5 ml, 3 ml et 5 ml de plasma préparé à partir de sang prélevé sur du citrate comme anticoagulant. Deux microlitres de l'ARN purifié ont ensuite été utilisés comme modèle dans les réactions de RT-qPCR pour évaluer la linéarité (A) du transcrit de l'ARNr 5S de référence et (B) du miR-21 à partir des différents volumes de plasma. Le kit Maxi de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen a permis de récupérer 92 % du transcrit de l'ARNr 5S à partir de 3 ml de plasma par rapport à la quantité présente dans 1,5 ml de plasma. En outre, 90 % de la transcription de l'ARNr 5S a été récupérée à partir de 5 ml de plasma par rapport à la quantité présente dans 3 ml de plasma. En ce qui concerne le miR-21, le kit Maxi de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen a permis de récupérer 91 % du miR-21 à partir de 3 ml de plasma par rapport à la quantité présente dans 1,5 ml de plasma. En outre, 90 % du miR-21 a été récupéré dans 5 ml de plasma par rapport à la quantité présente dans 3 ml de plasma. Figure 13. Détermination de la quantité d'inhibition présente dans les échantillons d'ARN plasmatique lors de la détection du transcrit 5S humain et du miR-21.L'ADN a été isolé à partir de 1,5 ml, 3 ml et 5 ml de plasma à l'aide du kit Maxi de purification de l'ARN du plasma/sérum de Norgen (Cat# 56200). Des volumes croissants de l'élution (2, 4 et 8 µl) ont été utilisés dans une réaction de transcription inverse de 20 µl suivie d'une réaction d'amplification par qPCR afin d'observer toute diminution de la valeur Ct. Une augmentation des valeurs Ct avec l'augmentation de la quantité de matrice serait une indication claire de la présence d'inhibiteurs de la PCR dans l'échantillon. Une augmentation du volume d'entrée de la PCR utilisée comme modèle dans la réaction de transcription inverse n'a pas affecté la valeur Ct générée par l'amplification qPCR pour (A) le transcrit de l'ARNr 5S et (B) le miR-21. En fait, les valeurs Ct. ont tendance à diminuer avec l'augmentation du volume d'entrée de la PCR, ce qui indique que l'ARN purifié à partir du plasma à l'aide du kit de Norgen est exempt des inhibiteurs courants habituellement présents dans le plasma. Next Cliquez pour afficher les données Kit Specifications Sample Volume Range 50 to 200 μL Anti-coagulant (for Plasma)* EDTA or Citrate Size of RNA Purified All sizes, including small RNA (< 200 nt) Minimum Elution Volume 10 μL Maximum Elution Volume 25 μL Time to Complete 10 Purifications 15-20 minutes Average Yield** Variable depending on specimen *This kit is suitable for the isolation of RNA from fresh or frozen serum or plasma prepared from blood collected on either EDTA or Citrate. Plasma samples prepared from blood collected on heparin should not be used as heparin can significantly interfere with many downstream applications such as RT-PCR. **Please check page 7 for Average Plasma/Serum Yields and Common RNA Quantification Methods. Storage Conditions and Product Stability All solutions should be kept tightly sealed and stored at room temperature. This kit is stable for 2 years after the date of shipment. It is recommended to warm Lysis Buffer A for 20 minutes at 60°C if any salt precipitation is observed.
Kits de purification de l'ARN du plasma/sérum Pour une purification rapide et simple de l'ARN circulant et de l'ARN exosomal à partir d'échantillons de plasma/sérum Kits de purification de l'ARN du plasma/sérum Pour une purification rapide et simple de l'ARN circulant et de l'ARN exosomal à partir d'échantillons de plasma/sérum SKU FR-55000 Variations Format Mini Midi Maxi Size 50 préparations Quantity Trouver un distributeur Contact